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傳代培養(yǎng)操作步驟：

一、貼壁培養(yǎng)

細胞傳代培養(yǎng)操作步驟如下：

（1）傳代前在倒置顯微鏡下觀察細胞形態(tài)和生長密度，當細胞生長密度達到80%~90%時,，即可進行傳代,。

（2）吸掉或倒掉培養(yǎng)瓶內(nèi)的培養(yǎng)液,。加入PBS清洗1~2次,，左右輕輕搖晃后棄掉,。

（3）根據(jù)培養(yǎng)瓶大小向瓶內(nèi)加入適量含EDTA的,，一般應覆蓋整個培養(yǎng)瓶底,。

（4）把培養(yǎng)瓶放入37℃ CO2培養(yǎng)箱進行消化，2~5min后拿出放在倒置顯微鏡下進行觀察,，當發(fā)現(xiàn)有70%~80%細胞收縮變圓,、細胞間隙變大時,，再輕輕拍打培養(yǎng)瓶使剩余細胞脫落，然后立即加入2倍量的培養(yǎng)液中止消化,，使用吸頭輕輕吹打,，混合均勻，以防消化過度,。

（5）吸出所有細胞懸液至離心管內(nèi),，1000rpm/min離心3~5min。

（6）棄上清,，加入適量培養(yǎng)液重懸細胞,，輕輕吹打混勻，使細胞均勻分散,。

（7）用吸頭吸取適量細胞懸液,，以適宜的密度接種于新的培養(yǎng)瓶中，補足培養(yǎng)液,，搖勻,，放置于37℃ CO2培養(yǎng)箱中進行培養(yǎng)。

（8）根據(jù)細胞生長狀態(tài)確定換液或傳代時間,，甚至進行細胞凍存,。

IMCD3小鼠腎臟內(nèi)髓集合管3上皮細胞

細胞基本屬性：

細胞詳細介紹：

二、懸浮細胞

傳代培養(yǎng)操作步驟如下：

一般實驗室中懸浮細胞傳代方法分為直接傳代法和離心傳代法（培養(yǎng)液中含有細胞碎片的情況下）,。當在顯微鏡下觀察到懸浮細胞已經(jīng)長滿至80%~90%（細胞懸液變黃）時,，即可進行傳代。

（1）嚴格進行無菌操作,，所用一切試劑及耗材均應無菌,，且須在無菌超凈工作臺中紫外照射30min以上，以免細胞發(fā)生污染,。

（2）所用培養(yǎng)液必須適宜細胞生存和生長。來源于不同動物種類,、組織類型的細胞,，對培養(yǎng)液的要求不一樣，必要時可用預實驗的方法選擇適當?shù)呐囵B(yǎng)液,。

（3）胎牛血清對于維持細胞生存,，促進細胞生長起著關鍵作用,。可根據(jù)文獻或預實驗選擇合適的胎牛血清,。一旦確定,，就應保持用至實驗完成。

（4）消化細胞時應避免消化時間過短導致消化不收集到的細胞數(shù)量少,，或消化時間過長導致細胞成團塊樣絮狀游離,，這時的細胞已有損傷或死亡，影響細胞數(shù)量和實驗進度,。

（5）細胞離心的時候應避免離心力過小收集的細胞數(shù)量不夠,，或離心力過大對細胞產(chǎn)生損傷。離心后的細胞沉淀棄去上清后,，應先彈散細胞沉淀,，再加入培養(yǎng)液重懸，這樣比直接吹打?qū)毎麚p傷小,，可以提高細胞活率,。

（6）吹打細胞時應盡量避免細胞的產(chǎn)生，以免損傷細胞,，影響細胞狀態(tài)（吹打過程中殘留部分液體在吸頭內(nèi)可以減少氣泡的產(chǎn)生）,。

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