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傳代培養(yǎng)操作步驟：

一,、貼壁培養(yǎng)

細(xì)胞傳代培養(yǎng)操作步驟如下：

（1）傳代前在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)和生長密度,，當(dāng)細(xì)胞生長密度達到80%~90%時，即可進行傳代,。

（2）吸掉或倒掉培養(yǎng)瓶內(nèi)的培養(yǎng)液。加入PBS清洗1~2次，左右輕輕搖晃后棄掉,。

（3）根據(jù)培養(yǎng)瓶大小向瓶內(nèi)加入適量含EDTA的，一般應(yīng)覆蓋整個培養(yǎng)瓶底,。

（4）把培養(yǎng)瓶放入37℃ CO2培養(yǎng)箱進行消化,，2~5min后拿出放在倒置顯微鏡下進行觀察，當(dāng)發(fā)現(xiàn)有70%~80%細(xì)胞收縮變圓、細(xì)胞間隙變大時,，再輕輕拍打培養(yǎng)瓶使剩余細(xì)胞脫落,，然后立即加入2倍量的培養(yǎng)液中止消化，使用吸頭輕輕吹打,，混合均勻,，以防消化過度。

（5）吸出所有細(xì)胞懸液至離心管內(nèi),，1000rpm/min離心3~5min,。

（6）棄上清，加入適量培養(yǎng)液重懸細(xì)胞,，輕輕吹打混勻,，使細(xì)胞均勻分散。

（7）用吸頭吸取適量細(xì)胞懸液,，以適宜的密度接種于新的培養(yǎng)瓶中,，補足培養(yǎng)液，搖勻,，放置于37℃ CO2培養(yǎng)箱中進行培養(yǎng),。

（8）根據(jù)細(xì)胞生長狀態(tài)確定換液或傳代時間，甚至進行細(xì)胞凍存,。

NCI-H239人非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞

細(xì)胞基本屬性：

細(xì)胞詳細(xì)介紹：

二、懸浮細(xì)胞

傳代培養(yǎng)操作步驟如下：

一般實驗室中懸浮細(xì)胞傳代方法分為直接傳代法和離心傳代法（培養(yǎng)液中含有細(xì)胞碎片的情況下）,。當(dāng)在顯微鏡下觀察到懸浮細(xì)胞已經(jīng)長滿至80%~90%（細(xì)胞懸液變黃）時,，即可進行傳代。

（1）嚴(yán)格進行無菌操作,，所用一切試劑及耗材均應(yīng)無菌,，且須在無菌超凈工作臺中紫外照射30min以上，以免細(xì)胞發(fā)生污染,。

（2）所用培養(yǎng)液必須適宜細(xì)胞生存和生長,。來源于不同動物種類、組織類型的細(xì)胞,，對培養(yǎng)液的要求不一樣，必要時可用預(yù)實驗的方法選擇適當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)液,。

（3）胎牛血清對于維持細(xì)胞生存,，促進細(xì)胞生長起著關(guān)鍵作用?？筛鶕?jù)文獻或預(yù)實驗選擇合適的胎牛血清,。一旦確定，就應(yīng)保持用至實驗完成,。

（4）消化細(xì)胞時應(yīng)避免消化時間過短導(dǎo)致消化不收集到的細(xì)胞數(shù)量少,，或消化時間過長導(dǎo)致細(xì)胞成團塊樣絮狀游離，這時的細(xì)胞已有損傷或死亡,，影響細(xì)胞數(shù)量和實驗進度,。

（5）細(xì)胞離心的時候應(yīng)避免離心力過小收集的細(xì)胞數(shù)量不夠，或離心力過大對細(xì)胞產(chǎn)生損傷,。離心后的細(xì)胞沉淀棄去上清后,，應(yīng)先彈散細(xì)胞沉淀，再加入培養(yǎng)液重懸,，這樣比直接吹打?qū)?xì)胞損傷小,，可以提高細(xì)胞活率,。

（6）吹打細(xì)胞時應(yīng)盡量避免細(xì)胞的產(chǎn)生，以免損傷細(xì)胞,，影響細(xì)胞狀態(tài)（吹打過程中殘留部分液體在吸頭內(nèi)可以減少氣泡的產(chǎn)生）,。

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FJX1： 四連接同源蛋白FJX1抗體 CD24 Others Human 人 CD24 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照)

CL-0408NEC(人食管癌細(xì)胞)5×106cells/瓶×2 人組織因子(TF)ELISA 試劑盒 Goat Anti-Chicken IgG/AP 堿性0酸酶(AP)標(biāo)記的羊抗雞IgG 0.1ml

G gamma3： G蛋白偶聯(lián)受體γ3抗體 hDPSCs, 人前磨牙牙髓干細(xì)胞 Human

HUVEC Growth Medium 2single donor Pellet #N/A > 1 mio.cells 軟骨細(xì)胞培養(yǎng)基CM 人組織型纖維溶酶激活物(t-PA)ELISA試劑盒 Goat Anti-Chicken IgG/HRP 辣根過氧化物酶標(biāo)記的羊抗雞IgG 0.1ml

G gamma7： G蛋白偶聯(lián)受體γ7抗體 敘利亞倉鼠腎細(xì)胞;BHK-21

RIN-m5f(大鼠胰島β細(xì)胞瘤細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 SGC7901(胃腺癌細(xì)胞) 大鼠(FE)ELISA 試劑盒 Alpha1-MG  大鼠α1微球蛋白 96T

Mine adenosyltransferase： 蛋酸腺苷轉(zhuǎn)移酶抗體 人細(xì)胞;Hela S3 [HeLaS3]

LIF Protein Human 重組人 LIF 蛋白 (Fc 標(biāo)簽) 大鼠調(diào)節(jié)轉(zhuǎn)錄肽(CA)ELISA試劑盒 Collagenase II(Mouse Collagenase Type II)  小鼠膠原酶II 96T

phospho-MAPK11(Thr180+Tyr182)： 0酸化原活化的蛋白激酶p38β抗體 CCL21 Others Human 人 CCL21 / 6Ckine 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽性對照)

小鼠腸靜脈內(nèi)皮細(xì)胞培養(yǎng)基 100mL 大鼠調(diào)節(jié)激活正常T-細(xì)胞表達分泌因子(RAES)ELISA試劑盒 MDC/CCL22(Human Macrophage-Derived Chemokine)  人巨噬細(xì)胞來源的趨化因子 96T

NCI-H239人非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞CXCL16 Protein Rat 重組大鼠 CXCL16 / SR-PSOX 蛋白 (His 標(biāo)簽) 人白細(xì)胞調(diào)節(jié)素(LR)ELISA 試劑盒 MLH1(Mutl homolog l gene) 錯配修復(fù)蛋白1抗原 0.5mg

ILT2/CD85j： 細(xì)胞表面樣轉(zhuǎn)錄因子2抗體 PDHA1 Others Human 人 PDHA1 / C54G1 (aa 30-390) 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽性對照)

人肝內(nèi)膽管上皮細(xì)胞培養(yǎng)基 100mL 人白細(xì)胞介素4受體(IL-4R)ELISA試劑盒 MUC5AC/Mucin 5AC(Gastric Mucin M1) 胃粘液素抗原 0.5mg

Integrin alpha 2/CD49b： 整合素α2抗體 非洲綠猴腎細(xì)胞系/IgR;VERO/IgR 大鼠肝癌細(xì)胞，CBRH-7919細(xì)胞 BEL-7405(肝癌細(xì)胞)

LILRA3 Others Human 人 ILT6 / LILRA3 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 人白細(xì)胞介素25(IL-25)ELISA試劑盒 MTNR1B/MTNR-1B(Melatonin receptor 1B) 褪黑素受體1B抗原 0.5mg