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傳代培養(yǎng)操作步驟：

一,、貼壁培養(yǎng)

細胞傳代培養(yǎng)操作步驟如下：

（1）傳代前在倒置顯微鏡下觀察細胞形態(tài)和生長密度，當細胞生長密度達到80%~90%時,，即可進行傳代,。

（2）吸掉或倒掉培養(yǎng)瓶內的培養(yǎng)液,。加入PBS清洗1~2次，左右輕輕搖晃后棄掉,。

（3）根據(jù)培養(yǎng)瓶大小向瓶內加入適量含EDTA的,，一般應覆蓋整個培養(yǎng)瓶底。

（4）把培養(yǎng)瓶放入37℃ CO2培養(yǎng)箱進行消化,，2~5min后拿出放在倒置顯微鏡下進行觀察,，當發(fā)現(xiàn)有70%~80%細胞收縮變圓、細胞間隙變大時,，再輕輕拍打培養(yǎng)瓶使剩余細胞脫落,，然后立即加入2倍量的培養(yǎng)液中止消化，使用吸頭輕輕吹打,，混合均勻,，以防消化過度。

（5）吸出所有細胞懸液至離心管內,，1000rpm/min離心3~5min,。

（6）棄上清,，加入適量培養(yǎng)液重懸細胞，輕輕吹打混勻,，使細胞均勻分散,。

（7）用吸頭吸取適量細胞懸液，以適宜的密度接種于新的培養(yǎng)瓶中,，補足培養(yǎng)液,，搖勻，放置于37℃ CO2培養(yǎng)箱中進行培養(yǎng),。

（8）根據(jù)細胞生長狀態(tài)確定換液或傳代時間,，甚至進行細胞凍存。

PL45人胰腺導管腺癌細胞

細胞基本屬性：

細胞詳細介紹：

二,、懸浮細胞

傳代培養(yǎng)操作步驟如下：

一般實驗室中懸浮細胞傳代方法分為直接傳代法和離心傳代法（培養(yǎng)液中含有細胞碎片的情況下）,。當在顯微鏡下觀察到懸浮細胞已經(jīng)長滿至80%~90%（細胞懸液變黃）時，即可進行傳代,。

（1）嚴格進行無菌操作，所用一切試劑及耗材均應無菌,，且須在無菌超凈工作臺中紫外照射30min以上,，以免細胞發(fā)生污染。

（2）所用培養(yǎng)液必須適宜細胞生存和生長,。來源于不同動物種類,、組織類型的細胞，對培養(yǎng)液的要求不一樣,，必要時可用預實驗的方法選擇適當?shù)呐囵B(yǎng)液,。

（3）胎牛血清對于維持細胞生存，促進細胞生長起著關鍵作用,?？筛鶕?jù)文獻或預實驗選擇合適的胎牛血清。一旦確定,，就應保持用至實驗完成,。

（4）消化細胞時應避免消化時間過短導致消化不收集到的細胞數(shù)量少，或消化時間過長導致細胞成團塊樣絮狀游離,，這時的細胞已有損傷或死亡,，影響細胞數(shù)量和實驗進度,。

（5）細胞離心的時候應避免離心力過小收集的細胞數(shù)量不夠，或離心力過大對細胞產生損傷,。離心后的細胞沉淀棄去上清后,，應先彈散細胞沉淀，再加入培養(yǎng)液重懸,，這樣比直接吹打對細胞損傷小,，可以提高細胞活率。

（6）吹打細胞時應盡量避免細胞的產生,，以免損傷細胞,，影響細胞狀態(tài)（吹打過程中殘留部分液體在吸頭內可以減少氣泡的產生）。

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