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商品屬性：

背景：

SUMO（小分子泛素修飾）蛋白酶1（Ulp1，來自釀酒酵母的Ubl特異性蛋白酶1）是一種高活性:的半胱蛋白酶,。Ulp1由于可以識別類泛素（UBL）蛋白SUMO（Smt3）的三級結(jié)構(gòu),，而不是其氨基酸序列，因此具有高度特異性,。SUMO融合標(biāo)簽作為N端融合伴侶，已被證明可以顯著提高原核和真核表達(dá)系統(tǒng)中功能性蛋白質(zhì)的產(chǎn)生，并顯著提高蛋白質(zhì)的穩(wěn)定性和溶解性,。

標(biāo)記：

1.將細(xì)胞培養(yǎng)基與EdU溶液按照500：1的比例混合，制成2×EdU標(biāo)記培養(yǎng)基,。

2.提前將2×EdU標(biāo)記培養(yǎng)基預(yù)熱,，然后將150微升2×EdU標(biāo)記培養(yǎng)基與等體積細(xì)胞培養(yǎng)基混合，獲得1×EdU溶液,。

【注】：①不建議替換全部培養(yǎng)基,，這樣可能會影響細(xì)胞增殖的速度。②配置好的培養(yǎng)基建議現(xiàn)用現(xiàn)配,，用量以沒過細(xì)胞為宜,。

3.孵育細(xì)胞2 h，棄培養(yǎng)基,。

【注】：①培養(yǎng)時(shí)間取決于細(xì)胞的增殖速度和生長狀態(tài),。②大多數(shù)腫瘤細(xì)胞以及粘附細(xì)胞系均可采用2 h的孵育時(shí)間。

4.以1xPBS清洗細(xì)胞兩次,，每次5 min, 以除去未摻入DNA的EdU殘留,。

【注】：對于貼壁不牢的細(xì)胞可降低清洗強(qiáng)度。

實(shí)驗(yàn)步驟：

1. 將細(xì)胞以 104-105 個(gè)細(xì)胞/孔的密度接種在 96 孔板 中,，加入 100μL 培養(yǎng)基,，含或不含待測化合物。在 CO2 培養(yǎng)箱中在 37℃ 下培養(yǎng)細(xì)胞 24 小時(shí),。

2. 向板中加入 10μL 不同濃度的待測物質(zhì),。

3. 在培養(yǎng)箱中將培養(yǎng)板培養(yǎng)適當(dāng)時(shí)間（如 6、12、24 或 48 小時(shí)）,。

4. 向板的每個(gè)孔中加入 10μL CCK-8 溶液,。小心不要將氣泡引入孔中。

5. 將平板在培養(yǎng)箱中孵育 1-4 小時(shí),。

6. 在讀板之前,，在定軌振蕩器上輕輕混勻。

7. 使用酶標(biāo)儀測量 450nm 處的吸光度,。

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