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測定意義：                         

β-GAL(EC 3.2.1.23)廣泛存在于動物,、植物,、微生物和培養(yǎng)細胞中，能夠催化β半乳糖苷化合物中β半乳糖苷鍵水解,，此外還具有轉半乳糖苷的作用,。β-GAL不僅可為植物的快速生長釋放儲存的能量,，還能在正常的多糖代謝,、細胞壁組分代謝以及衰老時細胞壁降解過程中催化多糖、糖蛋白以及半乳糖脂末端半乳糖殘基的水解,，釋放自由的半乳糖。

測定原理：

β-GAL分解對-苯-β-D-吡喃半乳糖苷生成對-,，后者在400nm有最大吸收峰，通過測定吸光值升高速率來計算β-GAL活性,。

自備用品：

可見分光光度計/酶標儀,、臺式離心機、水浴鍋,、可調(diào)式移液器,、微量石英比色皿/96孔板、研缽,、冰和蒸餾水,。

試劑一：液體×1瓶，室溫保存,。

試劑二：液體×1瓶,，4℃保存。              

試劑三：粉劑×2瓶,，－20℃保存。臨用前加入22mL試劑二，現(xiàn)配現(xiàn)用,。

試劑四：液體×1支，4℃保存,。

1、組織：按照組織質(zhì)量（g）：試劑一體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織,，加入1mL試劑一）進行冰浴勻漿,。16000g,，4℃離心20min,，取上清置冰上待測,。

2,、細菌、真菌：按照細胞數(shù)量（104個）：試劑一體積（mL）為500~1000：1的比例（建議500萬細胞加入1mL試劑一）,，冰浴超聲波破碎細胞（功率300w,，超聲3秒,，間隔7秒,，總時間3min）；16000g,， 4℃離心20min，取上清液置冰上待測,。

3,、血清等液體：直接測定。

（1）按照蛋白濃度計算

活性單位定義：25℃中每毫克蛋白每分鐘氧化1nmol NADH 為1個酶活單位,。

ADH (nmol/min/mg prot) =(△A÷ε÷d×V反總×109) ÷(Cpr×V樣)÷T

=1608×△÷Cpr

（2）按照樣本質(zhì)量計算

活性單位定義：25℃中每克組織每分鐘氧化1nmol NADH 為1個酶活單位。

ADH (nmol/min/g鮮重) =(△A÷ε÷d×V反總×109) ÷(W×V樣÷V樣總)÷T

=1608×△A÷W

（3）按細胞數(shù)量計算

活性單位定義：25℃中每104個細胞每分鐘氧化1nmol NADH 為1個酶活單位。

ADH (nmol/min/104cell) =(△A÷ε÷d×V反總×109)÷(細胞數(shù)量×V樣÷V樣總)÷T

=1608×△A ÷細胞數(shù)量

（4）按液體體積計算

活性單位定義：25℃中每毫升血清每分鐘氧化1nmol NADH 為1個酶活單位,。

ADH (nmol/min/mL) =(△A÷ε÷d×V反總×109) ÷V樣÷T

=1608×△A

ε：NADH摩爾消光系數(shù),，6.22×103L/mol/cm；d：比色皿光徑,，1 cm,；V反總：反應體系總體積，1000μL=0.001 L,；Cpr：上清液蛋白質(zhì)濃度,，mg/mL；W：樣本質(zhì)量,，g,；V樣：加入反應體系中上清液體積，100μL=0.1 mL,；T：反應時間,，1min。