目錄:上海一研生物科技有限公司>>生化檢測試劑盒>>糖異生系列>> 糖6磷酸酶（G6P)生化檢測試劑盒
| 供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | 100管/96樣 50管/48樣 |
|---|---|---|---|
| 貨號 | EY-01S1374 | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 生物產(chǎn)業(yè) |
| 主要用途 | 僅用于科研 |
商品屬性：
產(chǎn)品名稱：糖6磷酸酶（G6P)生化檢測試劑盒
規(guī)格：100管/96樣 50管/48樣
貨號 : EY-01S1374
測試方法:微量法 紫外分光光度法
分類：糖異生系列
商品詳情：
測定意義：
糖-6-磷酸酶（(glucose 6 phosphatase,，G6Pase,，EC 3.1.3.9）廣泛存在于動物、植物,、微生物和細胞中,，是糖異生過程水解糖-6-磷酸生成糖的限制酶，在保證血糖的動態(tài)平衡方面起著重要的作用,。
測定原理：
G6P催化糖-6-磷酸生成糖,，變旋酶和糖脫氫酶進一步依次催化NAD+還原生成NADH，在340nm下測定NADH生成速率,，即可反映G6P活性,。
需自備的儀器和用品：
分光光度計/酶標儀、臺式離心機,、可調(diào)式移液器,、微量石英比色皿/96孔板、研缽,、冰和蒸餾水,。
ADH測定操作：
1. 分光光度計預熱30 min,，調(diào)節(jié)波長到340 nm，蒸餾水調(diào)零,。
2. 試劑三在25℃水浴中保溫30 min,。
3. 在1mL石英比色皿中依次加入100μL樣本上清液、800μL試劑三和100μL試劑四,，迅速混勻后于340nm測定吸光值變化,，分別記錄15s和75s時吸光值，分別記為A1和A2,?！鰽測定管=A1-A2。
測定步驟：
1,、分光光度計預熱30min以上,，調(diào)節(jié)波長至340nm，蒸餾水調(diào)零,。
2,、將試劑二在37℃（哺乳動物）或25℃（其它物種）水浴10min以上。
3,、操作表：
試劑名稱（μL） | 測定孔 |
樣本 | 20 |
試劑二 | 760 |
試劑三 | 10 |
試劑四 | 10 |
將上述試劑按順序加入1 mL石英比色皿中,，混勻后立即在340 nm波長下記錄初始吸光度A1和反應(yīng)1min后的吸光度A2，計算ΔA=A1-A2,。
注意：若A1-A2大于0.5,，需將樣本用提取液稀釋，使A1-A2小于0.5,，可提高檢測靈敏度,。計算公式中乘以相應(yīng)稀釋倍數(shù)。
NAD-MDH活力單位的計算：
1,、血清（漿）NAD-MDH活力的計算
單位的定義：每毫升血清（漿）每分鐘消耗1 nmol的NADH定義為一個酶活力單位,。
NAD-MDH（nmol/min/mL）=[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷V樣÷T=6430×ΔA
2、組織,、細菌或細胞中NAD-MDH活力的計算:
（1）按樣本蛋白濃度計算：
單位的定義：每mg組織蛋白每分鐘消耗1 nmol的NADH定義為一個酶活力單位,。
NAD-MDH（nmol/min/mg prot）=[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷(V樣×Cpr) ÷T=6430×ΔA÷Cpr
（2）按樣本鮮重計算：
單位的定義：每g組織每分鐘消耗1 nmol的NADH定義為一個酶活力單位。
NAD-MDH（nmol/min/g 鮮重）=[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷（W× V樣÷V樣總）÷T =6430×ΔA÷W
（3）按細菌或細胞密度計算：
單位的定義：每1萬個細菌或細胞每分鐘消耗1 nmol的NADH定義為一個酶活力單位,。
NAD-MDH（nmol/min/104 cell）=[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷（2000×V樣÷V樣總）÷T=3.215×ΔA
V反總：反應(yīng)體系總體積,，8×10-4 L；ε：NADH摩爾消光系數(shù),，6.22×103 L / mol /cm,；d：比色皿光徑，1cm,；V樣：加入樣本體積,，0.02mL,；V樣總：加入提取液體積，1 mL,；T：反應(yīng)時間,，1 min；W：樣本質(zhì)量,，g,；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL,；2000：細胞或細菌總數(shù),，2000萬。
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