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| 參考價 | ￥300-￥5000 | /盒 |
參考價：￥300 ~ ￥5000
更新時間：2024-11-22 12:10:40瀏覽次數(shù)：766評價
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| 供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | 100管/96樣 50管/48樣 |
|---|---|---|---|
| 貨號 | EY-01S1365 | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 生物產(chǎn)業(yè) |
| 主要用途 | 僅用于科研 |
商品屬性：
產(chǎn)品名稱：亞鐵氧化酶（HP）生化檢測試劑盒
規(guī)格：100管/96樣 50管/48樣
貨號 : EY-01S1365
測試方法:微量法 可見分光光度法
分類：信號系列
商品詳情：
測定意義：
Hephaestin (HP)作為銅藍蛋白的同系物,是近年來發(fā)現(xiàn)的鐵轉(zhuǎn)運蛋白亞鐵氧化酶,，HP屬亞鐵氧化酶家族成員,具有亞鐵氧化酶的活性,參與體內(nèi)鐵代謝,。HP的表達可受鐵,、銅及鋅等金屬離子的調(diào)節(jié)。HP催化Fe2+氧化生成Fe3+,，在介導(dǎo)鐵的跨膜轉(zhuǎn)運中有重要作用,。
測定原理：
HP催化Fe2+氧化為Fe3+，Fe2+和ferrozine反應(yīng)顯色,，在560 nm下有特征吸光值,。通過測定Fe2+的減少速率可測得亞鐵氧化酶的活性。
自備用品：
酶標儀,、臺式離心機,、可調(diào)式移液器、96孔板,、研缽,、冰和蒸餾水。
粗酶液提?。?/p>
1,、組織：按照組織質(zhì)量（g）：試劑一體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1mL試劑一）進行冰浴勻漿,。16000g,，4℃離心20min，取上清置冰上待測。
2,、細菌,、真菌：按照細胞數(shù)量（104個）：試劑一體積（mL）為500~1000：1的比例（建議500萬細胞加入1mL試劑一），冰浴超聲波破碎細胞（功率300w,，超聲3秒,，間隔7秒，總時間3min）,；16000g,， 4℃離心20min，取上清液置冰上待測,。
3,、血清等液體：直接測定。
ADH測定操作：
1. 分光光度計預(yù)熱30 min,，調(diào)節(jié)波長到340 nm,，蒸餾水調(diào)零。
2. 試劑三在25℃水浴中保溫30 min,。
3. 在1mL石英比色皿中依次加入100μL樣本上清液,、800μL試劑三和100μL試劑四，迅速混勻后于340nm測定吸光值變化,，分別記錄15s和75s時吸光值,，分別記為A1和A2?！鰽測定管=A1-A2,。
測定步驟：
1、分光光度計預(yù)熱30min以上,，調(diào)節(jié)波長至340nm,，蒸餾水調(diào)零。
2,、將試劑二在37℃（哺乳動物）或25℃（其它物種）水浴10min以上,。
3、操作表：
試劑名稱（μL） | 測定孔 |
樣本 | 20 |
試劑二 | 760 |
試劑三 | 10 |
試劑四 | 10 |
將上述試劑按順序加入1 mL石英比色皿中,，混勻后立即在340 nm波長下記錄初始吸光度A1和反應(yīng)1min后的吸光度A2,，計算ΔA=A1-A2。
注意：若A1-A2大于0.5,，需將樣本用提取液稀釋,，使A1-A2小于0.5，可提高檢測靈敏度,。計算公式中乘以相應(yīng)稀釋倍數(shù),。
NAD-MDH活力單位的計算：
1,、血清（漿）NAD-MDH活力的計算
單位的定義：每毫升血清（漿）每分鐘消耗1 nmol的NADH定義為一個酶活力單位。
NAD-MDH（nmol/min/mL）=[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷V樣÷T=6430×ΔA
2,、組織、細菌或細胞中NAD-MDH活力的計算:
（1）按樣本蛋白濃度計算：
單位的定義：每mg組織蛋白每分鐘消耗1 nmol的NADH定義為一個酶活力單位,。
NAD-MDH（nmol/min/mg prot）=[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷(V樣×Cpr) ÷T=6430×ΔA÷Cpr
（2）按樣本鮮重計算：
單位的定義：每g組織每分鐘消耗1 nmol的NADH定義為一個酶活力單位,。
NAD-MDH（nmol/min/g 鮮重）=[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷（W× V樣÷V樣總）÷T =6430×ΔA÷W
（3）按細菌或細胞密度計算：
單位的定義：每1萬個細菌或細胞每分鐘消耗1 nmol的NADH定義為一個酶活力單位。
NAD-MDH（nmol/min/104 cell）=[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷（2000×V樣÷V樣總）÷T=3.215×ΔA
V反總：反應(yīng)體系總體積,，8×10-4 L,；ε：NADH摩爾消光系數(shù)，6.22×103 L / mol /cm,；d：比色皿光徑,，1cm；V樣：加入樣本體積,，0.02mL,；V樣總：加入提取液體積，1 mL,；T：反應(yīng)時間,，1 min；W：樣本質(zhì)量,，g,；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL,；2000：細胞或細菌總數(shù),，2000萬。
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