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商品屬性：

產(chǎn)品名稱：細胞色素b5含量生化檢測試劑盒

規(guī)格：100管/96樣 50管/48樣 

貨號 : EY-01S1266

測試方法:微量法　可見分光光度法　　

分類：P450系列

商品詳情：

測定意義：

細胞色素P450酶是一組主要存在于肝臟的同工酶,，在外源物質代謝中具有重要作用,，尤其是藥物和毒物的代謝,。細胞色素P450和細胞色素b5是P450酶系的兩個血紅素蛋白,，其比值的變化與P450代謝活性密切相關。

測定原理：

氧化型細胞色素b5經(jīng)連二亞硫酸鈉還原后,，在424nm處有最大吸收峰,，通過測定424nm和490nm處吸光值的差異，即可計算出細胞色素b5的含量,。

自備儀器和用品：

普通離心機,，超速離心機、可調式移液槍,、紫外分光光度計/酶標儀,、微量玻璃比色皿/96孔板、和蒸餾水,。

粗酶液提?。?br/>

1、組織：按照組織質量（g）：試劑一體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1mL試劑一）進行冰浴勻漿,。16000g,，4℃離心20min，取上清置冰上待測,。

2,、細菌、真菌：按照細胞數(shù)量（104個）：試劑一體積（mL）為500~1000：1的比例（建議500萬細胞加入1mL試劑一）,，冰浴超聲波破碎細胞（功率300w,，超聲3秒，間隔7秒,，總時間3min）,；16000g， 4℃離心20min,，取上清液置冰上待測,。

3、血清等液體：直接測定,。

ADH測定操作：

1. 分光光度計預熱30 min,，調節(jié)波長到340 nm，蒸餾水調零,。

2. 試劑三在25℃水浴中保溫30 min,。

3. 在1mL石英比色皿中依次加入100μL樣本上清液、800μL試劑三和100μL試劑四,，迅速混勻后于340nm測定吸光值變化,，分別記錄15s和75s時吸光值，分別記為A1和A2,?！鰽測定管=A1-A2。

測定步驟：

1,、分光光度計預熱30min以上,，調節(jié)波長至340nm，蒸餾水調零,。

2,、將試劑二在37℃（哺乳動物）或25℃（其它物種）水浴10min以上,。

3,、操作表：

將上述試劑按順序加入1 mL石英比色皿中，混勻后立即在340 nm波長下記錄初始吸光度A1和反應1min后的吸光度A2,，計算ΔA=A1-A2,。

注意：若A1-A2大于0.5，需將樣本用提取液稀釋,，使A1-A2小于0.5,，可提高檢測靈敏度,。計算公式中乘以相應稀釋倍數(shù)。

NAD-MDH活力單位的計算：

1,、血清（漿）NAD-MDH活力的計算

單位的定義：每毫升血清（漿）每分鐘消耗1 nmol的NADH定義為一個酶活力單位,。

NAD-MDH（nmol/min/mL）=[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷V樣÷T=6430×ΔA

2、組織,、細菌或細胞中NAD-MDH活力的計算:

（1）按樣本蛋白濃度計算：

單位的定義：每mg組織蛋白每分鐘消耗1 nmol的NADH定義為一個酶活力單位,。

NAD-MDH（nmol/min/mg prot）=[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷(V樣×Cpr) ÷T=6430×ΔA÷Cpr

（2）按樣本鮮重計算：

單位的定義：每g組織每分鐘消耗1 nmol的NADH定義為一個酶活力單位。

NAD-MDH（nmol/min/g 鮮重）=[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷（W× V樣÷V樣總）÷T =6430×ΔA÷W

（3）按細菌或細胞密度計算：

單位的定義：每1萬個細菌或細胞每分鐘消耗1 nmol的NADH定義為一個酶活力單位,。

NAD-MDH（nmol/min/104 cell）=[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷（2000×V樣÷V樣總）÷T=3.215×ΔA

V反總：反應體系總體積,，8×10-4 L；ε：NADH摩爾消光系數(shù),，6.22×103 L / mol /cm,；d：比色皿光徑，1cm,；V樣：加入樣本體積,，0.02mL；V樣總：加入提取液體積,，1 mL,；T：反應時間，1 min,；W：樣本質量,，g；Cpr：樣本蛋白質濃度,，mg/mL,；2000：細胞或細菌總數(shù)，2000萬,。

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