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測定意義

木質(zhì)素過氧化物酶（EC1.11.1.14）是一種含亞鐵血紅素的過氧化物酶,，屬于木質(zhì)素降解酶系,，在木質(zhì)素生物降解、造紙工業(yè),、紡織工業(yè),、芳香化合物轉(zhuǎn)化與降解及環(huán)境污染控制等方面具有較大的應(yīng)用潛力。

測定原理

木質(zhì)素過氧化物酶催化天青脫甲基,，在651nm處測定吸光值減少,。自備實驗用品及儀器

天平、研缽,、低溫離心機,、酶標(biāo)儀、96孔板,、可調(diào)式移液器,、冰。

試劑一：液體×1瓶,，室溫保存,。

試劑二：液體×1瓶，4℃保存,。              

試劑三：粉劑×2瓶,，－20℃保存。臨用前加入22mL試劑二,，現(xiàn)配現(xiàn)用,。

試劑四：液體×1支，4℃保存,。

1,、組織：按照組織質(zhì)量（g）：試劑一體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1mL試劑一）進行冰浴勻漿,。16000g,，4℃離心20min，取上清置冰上待測,。

2,、細菌、真菌：按照細胞數(shù)量（104個）：試劑一體積（mL）為500~1000：1的比例（建議500萬細胞加入1mL試劑一）,，冰浴超聲波破碎細胞（功率300w,，超聲3秒，間隔7秒,，總時間3min）,；16000g,， 4℃離心20min，取上清液置冰上待測,。

3,、血清等液體：直接測定。

（1）按照蛋白濃度計算

活性單位定義：25℃中每毫克蛋白每分鐘氧化1nmol NADH 為1個酶活單位,。

ADH (nmol/min/mg prot) =(△A÷ε÷d×V反總×109) ÷(Cpr×V樣)÷T

=1608×△÷Cpr

（2）按照樣本質(zhì)量計算

活性單位定義：25℃中每克組織每分鐘氧化1nmol NADH 為1個酶活單位,。

ADH (nmol/min/g鮮重) =(△A÷ε÷d×V反總×109) ÷(W×V樣÷V樣總)÷T

=1608×△A÷W

（3）按細胞數(shù)量計算

活性單位定義：25℃中每104個細胞每分鐘氧化1nmol NADH 為1個酶活單位。

ADH (nmol/min/104cell) =(△A÷ε÷d×V反總×109)÷(細胞數(shù)量×V樣÷V樣總)÷T

=1608×△A ÷細胞數(shù)量

（4）按液體體積計算

活性單位定義：25℃中每毫升血清每分鐘氧化1nmol NADH 為1個酶活單位,。

ADH (nmol/min/mL) =(△A÷ε÷d×V反總×109) ÷V樣÷T

=1608×△A

ε：NADH摩爾消光系數(shù),，6.22×103L/mol/cm；d：比色皿光徑,，1 cm,；V反總：反應(yīng)體系總體積，1000μL=0.001 L,；Cpr：上清液蛋白質(zhì)濃度,，mg/mL；W：樣本質(zhì)量,，g,；V樣：加入反應(yīng)體系中上清液體積，100μL=0.1 mL,；T：反應(yīng)時間,，1min。