ELISA樣本值低于空白值的原因
*,、實驗誤差
誤差分為三類,，系統(tǒng)誤差、隨機誤差和過失誤差,。這三類誤差中,，系統(tǒng)誤差對樣本值和空白值之間的差異無影響。ELISA樣本值低于空白值在誤差方面主要來源于隨機誤差和過失誤差,。
1.隨機誤差 Random Error
無法控制的變因,，使測量值產(chǎn)生隨機分布的誤差，服從統(tǒng)計學上的正態(tài)分布,。從統(tǒng)計學上來看,，測量值有99%的置信限在±3SD之間，如果CV值是20%,，隨機誤差的邊界就是±60%，也就是說在CV值20%的狀況下,，樣本值低于空白值60%之內(nèi),，有可能是隨機誤差的影響,，特別是空白值只有一個值時。
隨機誤差不可消除,，只能通過多次測量獲得的均值盡量逼近真值,。降低隨機誤差的解決方案1是增加空白值的重復數(shù)量，一般認為空白值重復10次,，測量均值接近真值,。
方案2是提高實驗技能，也能夠有效降低隨機誤差的影響,。如果CV值在5%,，樣本值趨近于零時，在統(tǒng)計上樣本值將不會低于空白值15%,。
2.過失誤差 Gross Error
主要是由于測量者的疏忽,，犯了不應有的錯誤造成的。過失誤差是可以避免的,。針對于ELISA樣本值低于空白值的問題,，過失誤差產(chǎn)生的原因多數(shù)來源于空白孔HRP的重復加樣或污染或洗滌不干凈，造成空白值偏高,，相對比來說,，樣本值低于空白值。解決方案就是重復實驗,，規(guī)范操作,。
第二、基質(zhì)效應
分析中,，基質(zhì)指的是樣本中被分析物之外的組分,，基質(zhì)常常對分析物的分析過程有顯著的干擾，并影響分析結果的準確性,，這些影響和干擾被稱為基質(zhì)效應,。ELISA試劑盒在開發(fā)過程中，標準品不能采用人或動物血清,、血漿作為標準曲線的稀釋液,，只能采用其模擬物。模擬物與被測樣本在蛋白豐度,、復雜性,、pH等因素都會存在差異。當樣本的基質(zhì)與其模擬物相比,，降低抗原抗體的結合,，便產(chǎn)生了樣本值低于空白值的現(xiàn)象。造成樣本值無法計算出數(shù)值,，或者數(shù)值為負,。
目前zui常用的去除基質(zhì)效應的方法是,，通過已知分析物濃度的標準樣品，同時盡可能保持樣本中的基質(zhì)不變,，建立一個校正曲線,。
當單個樣本或少量樣本值低于空白值時，可能是誤差原因,，這時應增加重復,，提高操作技能。當大量樣本都低于空白值時,，應考慮基質(zhì)效應的影響,，建立校正曲線予以修正。
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