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視網(wǎng)膜上皮細(xì)胞,；操作步驟:

1、貼壁細(xì)胞的消化

①吸除培養(yǎng)液,，用無(wú)菌 PBS,、Hanks 液或無(wú)血清培養(yǎng)液洗滌細(xì)胞一次，以去除殘余的血清,。

②加入少量生物 Trypsin-EDTA solution,，略蓋過(guò)細(xì)胞即可，室溫放置 0.5～2min,， 不同的細(xì)胞消化時(shí)間有所不同,。

③顯微鏡下觀察，細(xì)胞明顯收縮,，并且肉眼觀察培養(yǎng)器皿底部發(fā)現(xiàn)細(xì)胞的形態(tài)發(fā)生明顯的變

化,；或者用槍吹打細(xì)胞發(fā)現(xiàn)細(xì)胞剛好可以被吹打下來(lái),，吸除細(xì)胞消化液。加入含血清的  *細(xì)胞培養(yǎng)液,，吹打下細(xì)胞，即可直接用于后續(xù)實(shí)驗(yàn),。

④如果發(fā)現(xiàn)消化不足,，則加入 Trypsin-EDTA solution 重新消化。

⑤如果發(fā)現(xiàn)細(xì)胞消化時(shí)間過(guò)長(zhǎng),，未及吹打細(xì)胞,，細(xì)胞已經(jīng)有部分直接從培養(yǎng)器皿底部脫落,， 直接用細(xì)胞培養(yǎng)液把細(xì)胞全部吹打下來(lái),。1000～2000g 離心 1min,，沉淀細(xì)胞,，盡量去除細(xì)胞消化液后,，加入含血清的*培養(yǎng)液重新懸浮細(xì)胞,，即可用于后續(xù)實(shí)驗(yàn),。

2,、組織的消化不同的組織需要消化的時(shí)間相差很大，通常以消化后可以充分打散組織為宜,。

凍保存細(xì)胞之方法

冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時(shí)（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 儲(chǔ)存,。

冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機(jī)中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase儲(chǔ)存,。*-20 ℃不可超過(guò)1 小時(shí),， 以防止冰晶過(guò)大，造成細(xì)胞大量死亡,，亦可跳過(guò)此步驟直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些,。