感覺態(tài)細胞的儲存:
每次轉(zhuǎn)化時使用新鮮的細胞是明智的,因為長時間儲存,,轉(zhuǎn)化效率會降低,,但這并不總是可行的。
感受態(tài)細胞可以存儲在-80°C長達一年,,沒有轉(zhuǎn)化潛能的損失,。然而,瞬間凍結(jié)在液氮或-80°C冰箱是不建議的,。需要在冷凍保護劑中,,像哺乳動物細胞一樣緩慢地冷凍。
使用硬紙板或聚苯乙烯泡沫塑料盒等儲存,。
用紙片等將盒子里的細胞管隔開,,分成多個小格子,。
復(fù)蘇過程中,在37°C解凍細胞,,轉(zhuǎn)化前用豐富培養(yǎng)基清洗防凍劑,。
感覺態(tài)細胞的制備注意事項:
1、配制溶液的水受有機污染,,會降低感受態(tài)的轉(zhuǎn)化率,;
2、液氮速凍可以提高轉(zhuǎn)化效率約5倍,;
3,、甘油會使細菌沉淀附著力降低;
4,、感受態(tài)細胞是很脆弱的,,實驗操作過程中,動作要輕,;
5,、制備感受態(tài),所用的試劑及器具的潔凈程度要求高,;操作要求嚴格,;轉(zhuǎn)化效率高;
6,、為達到高轉(zhuǎn)化效率,,活細胞數(shù)需少于108個細胞/ml;
7,、不同菌株之間,,OD600的數(shù)值與每毫升中活細胞數(shù)間的關(guān)系很大;
8,、在大腸桿菌生長曲線上,,在生長初期和末期兩個時期獲得較高轉(zhuǎn)化率;
9,、有實驗曾表明,,可以在4℃在氯化鈣溶液中保存24-48h,在起初保存的12-24h內(nèi),,轉(zhuǎn)化效率會有所提高,,然后降低到初始水平;
10,、對于克隆用途來說,,每份細胞體積有50μl足矣,;
11,、玻璃管會降低轉(zhuǎn)化率約10倍,。
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