5-羥色胺轉(zhuǎn)運(yùn)體蛋白試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)。往預(yù)先包被胎盤(pán)催乳素抗體的包被微孔中,,依次加入標(biāo)本,、標(biāo)準(zhǔn)品、HRP標(biāo)記的檢測(cè)抗體,,經(jīng)過(guò)溫育并洗滌,。用底物顯色,在過(guò)氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成黃色,。顏色的深淺和樣品中試劑盒指標(biāo)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀測(cè)定吸光度,,計(jì)算樣品濃度。
5-羥色胺轉(zhuǎn)運(yùn)體蛋白試劑盒的樣本實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備:
液體樣本:包括血清,、血漿,、尿液、胸腹水,、腦脊液,、細(xì)胞培養(yǎng)上清等,。
(1)血清
室溫血液自然凝固10-20分鐘后,,離心20分鐘左右,。仔細(xì)收集上清。保存過(guò)程中如有沉淀形成,,應(yīng)再次離心,。
(2)血漿:
應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA,、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑,,混合10-20分鐘后,離心20分鐘左右,。仔細(xì)收集上清,。保存過(guò)程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心,。
?。?)尿液:
用無(wú)菌管收集。離心20分鐘左右,。仔細(xì)收集上清,。保存過(guò)程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心,。胸腹水,、腦脊液參照此實(shí)行。
?。?)細(xì)胞培養(yǎng)上清:
檢測(cè)分泌性的成份時(shí),,用無(wú)菌管收集。離心20分鐘左右,。仔細(xì)收集上清,。
(5)培養(yǎng)細(xì)胞
檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)的成份時(shí),,用PBS稀釋細(xì)胞懸液,,細(xì)胞濃度高。通過(guò)反復(fù)凍融或加入組織蛋白萃取試劑,,以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份,。離心20分鐘左右。仔細(xì)收集上清,。保存過(guò)程中如有沉淀形成,,應(yīng)再次離心。
?。?)組織標(biāo)本
切割標(biāo)本后,,稱(chēng)取重量,。加入一定量的PBS,PH7.4,。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆?。?biāo)本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS,,或組織蛋白萃取試劑,,用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿化。離心20分鐘左右,。仔細(xì)收集上清,。分裝后一份待檢測(cè),其余冷凍備用,。
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