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轉(zhuǎn)基因大豆MON87705品系核酸檢測試劑盒?反應(yīng)五要素

閱讀:784      發(fā)布時間:2021-10-13
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轉(zhuǎn)基因大豆MON87705品系核酸檢測試劑盒反應(yīng)五要素:


參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物,、酶、dNTP,、模板和Mg2+


引物:引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵,,PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補的程度。理論上,,只要知道任何一段模板DNA序列,, 就能按其設(shè)計互補的寡核苷酸鏈做引物,利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴增,。設(shè)計引物應(yīng)遵循以下原則:


①引物長度: 15-30bp,,常用為20bp左右。


②引物擴增跨度: 以200-500bp為宜,特定條件下可擴增長至10kb的片段,。


③引物堿基:G+C含量以40-60%為宜,,G+C太少擴增效果不佳,G+C過多易出現(xiàn)非特異條帶,。ATGC*隨機分布,避免5個以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列,。


④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級結(jié)構(gòu),,避免兩條引物間互補,特別是3'端的互補,,否則會形成引物二聚體,,產(chǎn)生非特異的擴增條帶。


⑤引物3'端的堿基,,特別是最末及倒數(shù)第二個堿基,,應(yīng)嚴(yán)格要求配對,以避免因末端堿基不配對而導(dǎo)致PCR失敗,。


⑥引物中有或能加上合適的酶切位點,, 被擴增的靶序列*有適宜的酶切位點, 這對酶切分析或分子克隆很有好處,。


⑦引物的特異性:引物應(yīng)與核酸序列數(shù)據(jù)庫的其它序列無明顯同源性,。


引物量:每條引物的濃度0.1~1umol或10~100pmol,以*引物量產(chǎn)生所需要的結(jié)果為好,,引物濃度偏高會引起錯配和非特異性擴增,,且可增加引物之間形成二聚體的機會。

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