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小鼠抗內(nèi)皮細(xì)胞抗體elisa試劑盒樣本實驗前準(zhǔn)備步驟

閱讀:922      發(fā)布時間:2020-3-12
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小鼠抗內(nèi)皮細(xì)胞抗體elisa試劑盒樣本實驗前準(zhǔn)備:
ELISA試劑盒液體樣本:包括血清,、血漿,、尿液、胸腹水,、腦脊液,、細(xì)胞培養(yǎng)上清等。
1血清
室溫血液自然凝固10-20分鐘后,,離心20分鐘左右2000-3000轉(zhuǎn)/分,。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成,,應(yīng)再次離心,。
2血漿:
應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA,、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑,混合10-20分鐘后,,離心20分鐘左右2000-3000轉(zhuǎn)/分,。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成,,應(yīng)再次離心,。
3尿液:
用無菌管收集。離心20分鐘左右2000-3000轉(zhuǎn)/分,。仔細(xì)收集上清,。保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心,。胸腹水,、腦脊液參照此實行。
4細(xì)胞培養(yǎng)上清:
檢測分泌性的成份時,,用無菌管收集,。離心20分鐘左右2000-3000轉(zhuǎn)/分。仔細(xì)收集上清,。
5培養(yǎng)細(xì)胞
檢測細(xì)胞內(nèi)的成份時,,用PBSPH7.2-7.4稀釋細(xì)胞懸液,細(xì)胞濃度達(dá)到100萬/ml左右,。通過反復(fù)凍融或加入組織蛋白萃取試劑,,以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右2000-3000轉(zhuǎn)/分,。仔細(xì)收集上清,。保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心,。
6組織標(biāo)本
切割標(biāo)本后,,稱取重量。加入一定量的PBS,,PH7.4,。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆谩?biāo)本融化后仍然保持2-8℃的溫度,。加入一定量的PBSPH7.4,,或組織蛋白萃取試劑, 用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿化。離心20分鐘左右2000-3000轉(zhuǎn)/分,。仔細(xì)收集上清,。分裝后一份待檢測,其余冷凍備用。
 

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