在運(yùn)用ELISA方法測(cè)定抗體方面，通常所用的方法稱(chēng)為間接法,，也是目前zui常用的方法,，其原理：間接法首先用抗原包被于固相載體，這些包被的抗原必須是可溶性的,，或者至少是極微小的顆粒,，經(jīng)洗滌，加入含有被測(cè)抗體之標(biāo)本,，再經(jīng)孵育洗滌后,，加入酶標(biāo)記抗抗體，(對(duì)人的標(biāo)本來(lái)說(shuō)即加酶標(biāo)抗人球蛋白IgG,、IgM)，再經(jīng)孵育洗滌后,，加底物顯色,底物降解的量,，即為欲測(cè)抗體的量，其結(jié)果可用目測(cè)或用分光光度計(jì)定量測(cè)定,。
操作步驟：
1.將抗原按5 μg/ml稀釋于碳酸鹽緩沖液(pH 9.6),，100 μl /孔,，4℃過(guò)夜。
2.次日PBS－T清洗4次(快1慢3,，間隔5分鐘),。
3.加2％BSA封閉室溫1 h，200 μl /孔,。
4.陽(yáng)性對(duì)照從10ug/ml,，做倍必稀釋?zhuān)郎y(cè)血清從1：50做倍比稀釋?zhuān)A(yù)試驗(yàn)后確定稀釋倍數(shù)及陽(yáng)性對(duì)照的起始濃度及稀釋數(shù)量（以可以做標(biāo)準(zhǔn)曲線為參數(shù)），室溫1h,。
5.PBS－T清洗4次(快1慢3,，間隔5分鐘)。
6.加入1：3000（不同公司有不同的推薦稀釋度） PBS－T稀釋的HRP標(biāo)記的山羊抗人IgG,，100 μl /孔,，室溫1h。
7.PBS－T清洗4次(快1慢3,，間隔5分鐘),。
8.顯色，100 μl /孔,，顏色變深后中止顯色,，2M硫酸在BIO－RAD酶標(biāo)儀上讀數(shù)，可用ABTS,，OPD,，TMB等
(空格分隔,最多3個(gè),單個(gè)標(biāo)簽最多10個(gè)字符)
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