青海發(fā)光桿菌中蛋白質(zhì)的提取實驗步驟
一,、實驗試劑
采用T7 Tag Affinity Purification Kit
T7 Tag抗體瓊脂,。B/W緩沖液：4.29 mM Na2HPO4，1.47 mM KH2PO4,，2.7 mM KCl,， 0.137 mM NaCl，1%吐溫-20,，pH7.3 洗脫緩沖液: 0.1 M檸檬酸，pH2.2 中和緩沖液：2 M Tris,，pH10.4,。 PEG 20 000,。
二、實驗步驟
1. 100 ml 含重組表達(dá)質(zhì)粒的菌體誘導(dǎo)后,，離心5 000 g×5 min,，棄上清，收獲菌體,，用10 ml預(yù)冷的B/W緩沖液重懸,。
2. 重懸液于冰上超聲處理，直至樣品不再粘稠,，4℃離心 14 000 g×30 min,，取上清液，0.45 μm膜抽濾后作為樣品液,。
3. 將結(jié)合T7 Tag抗體的瓊脂充分懸起,，平衡至室溫，裝入層析柱中,。
4. B/W緩沖液平衡后樣品液過柱,。
5. 10 ml B/W緩沖液過柱，洗去未結(jié)合蛋白,。
6. 用5 ml洗脫緩沖液過柱,，每次1 ml，洗脫液用含150 μl中和緩沖液的離心管收集,，混勻后置于冰上,，直接SDS-PAGE分析。
7. 將洗脫下來的蛋白放入透析袋中,，雙蒸水透析24 h,，中間換液數(shù)次。
8. 用PEG 20000濃縮蛋白,。
三,、注意事項
青海發(fā)光桿菌蛋白在過層析柱前，要0.45 μm膜抽濾,，否則幾次純化后,，柱子中會有不溶物。
100667-200401 含量測定 50mg 依托度酸
100668-200401 HPLC法含量測定 50mg 鹽酸拓?fù)涮婵?/p>
100670-200401 含量測定 100mg 扎來普隆
100672-200401 HPLC法含量測定 100mg 齊多夫定
100673-200401 HPLC法含量測定 50mg 鹽酸羅格列酮
100674-200301 含量測定 100mg 格列美脲
100675-200301 檢查用 50mg 格列美脲雜質(zhì)2
100677-200401 含量測定 100mg 苯溴馬隆
100679-200401 HPLC法含量測定 50mg 美洛昔康
青海發(fā)光桿菌
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