1．亮發(fā)光桿菌菌種準備
1) 發(fā)光細菌新鮮菌懸液的制備
(1) 斜面菌種培養(yǎng),。于測定前48h取保存菌種,，于新鮮斜面上接出*代斜面,，(20±0.5)℃培養(yǎng)24h立即轉(zhuǎn)接第二代斜面，(20±0.5)℃培養(yǎng)12h,，再接出第三代斜面,，(20±0.5)℃培養(yǎng)12h后備用,。每次接種量不超過1接種耳。
(2）搖瓶菌液培養(yǎng),。取第三代斜面菌種近1環(huán),，幾接種于裝有50mL培養(yǎng)液的250mL三角瓶內(nèi)，(20±0. 5) ℃ ,184r/min下培養(yǎng) 12-14h,，備用,。
(3) 將培養(yǎng)液稀釋至每毫升108一109個細胞，初始發(fā)光度不低于800mV,，置冰浴中備用,。
2）菌液復蘇
取冷藏的發(fā)光菌凍干粉，置冰浴中,，加入0. 5mL冷的2 % NaCl溶液,，充分搖勻，復蘇2min,，使其具有微微綠光,，初始發(fā)光度不低于800mV。
2．樣品采集與處理
1) 水樣
(1) 從不同工業(yè)廢水的各排放口,，每4h采樣一次,，每次取樣后于4℃保存，連續(xù)采集24h后,，均勻混合后備用,。
(2) 納污水體取其入口、中心,、出口三個斷面混合水樣備用,。
(3）以同上方法采集清潔水，作空白對照,。
濁度大的污水,，需靜置后取上清液。一般樣品不需加任何處理,。水樣按3%比例投加NaCl,，置冰箱備用。
2) 氣體樣品
以大氣采樣法采取一定體積的大氣樣品,，通過氣體吸收液（(5mL)中吸收,，按3％比例投加NaCl，置冰箱備用,，同法收集清潔空氣作為對照組,。
3) 固體樣品
取固體廢棄物，按《工業(yè)固體廢棄物有害特性試驗與監(jiān)測分析方法》制備浸出液，取上清液,，按3％比例投加NaCl,，置冰箱備用。
3．亮發(fā)光桿菌實驗濃度的選擇
在預備實驗的濃度范圍內(nèi),，按等對數(shù)間距或百分濃度取3-5個實驗濃度,，同時設空白對照和參比毒物系列濃度組。
4．發(fā)光細菌法生物毒性瀏定
1) 工業(yè)廢水或有毒物質(zhì)的生物毒性測定
(1) 發(fā)光菌懸液初始發(fā)光度測定,。取4. 9mL 3%NaCl溶液于比色管內(nèi),，加新鮮發(fā)光菌懸液或凍干粉復蘇菌懸液10μL，若測量發(fā)光度在800mV以上,，允許置冰浴中備用,。
(2) 取已處理待測廢水樣品，按等對數(shù)間距或百分濃度編號,，并注明采集點,。
(3) 按表4-40-1依次加入稀釋液，待測水樣及參比毒物系列濃度溶液,。
(4) 打開生物毒性測試儀電源,，預熱15min，調(diào)零點,，備用,。
(5) 每管加入菌懸液10μL，準確作用5 min或15min,，依次測定其發(fā)光強度,，記錄毫伏數(shù)。
每個濃度設3管重復,。
2) 工業(yè)廢氣（或有害氣體）的生物毒性測定
(1) 氣體直接通入法,。用注射器直接注入氣體于菌懸液中，經(jīng)10-20min測定發(fā)光菌強度的變化,。
(2) 氣體吸收法,。方法同工業(yè)廢水測定法。
(3) 固體亮發(fā)光桿菌落法,。挑選固態(tài)培養(yǎng)對數(shù)生長期的發(fā)光菌單菌落,，連同培養(yǎng)基切下，置比色管內(nèi),，測定初始發(fā)光強度,，然后用注射器將待測氣體注入菌苔表面，經(jīng)10-20min后,，測定發(fā)光度的變化,。
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