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1．亮發(fā)光桿菌菌種準(zhǔn)備

1) 發(fā)光細(xì)菌新鮮菌懸液的制備

(1) 斜面菌種培養(yǎng)。于測(cè)定前48h取保存菌種,，于新鮮斜面上接出*代斜面,，(20±0.5)℃培養(yǎng)24h立即轉(zhuǎn)接第二代斜面，(20±0.5)℃培養(yǎng)12h,，再接出第三代斜面,，(20±0.5)℃培養(yǎng)12h后備用。每次接種量不超過(guò)1接種耳,。

(2）搖瓶菌液培養(yǎng),。取第三代斜面菌種近1環(huán)，幾接種于裝有50mL培養(yǎng)液的250mL三角瓶?jī)?nèi),，(20±0. 5) ℃ ,184r/min下培養(yǎng) 12-14h,，備用。

(3) 將培養(yǎng)液稀釋至每毫升108一109個(gè)細(xì)胞,，初始發(fā)光度不低于800mV,，置冰浴中備用,。

2）菌液復(fù)蘇

取冷藏的發(fā)光菌凍干粉,，置冰浴中，加入0. 5mL冷的2 % NaCl溶液,，充分搖勻,，復(fù)蘇2min，使其具有微微綠光,，初始發(fā)光度不低于800mV,。

2．樣品采集與處理

1) 水樣

(1) 從不同工業(yè)廢水的各排放口，每4h采樣一次,，每次取樣后于4℃保存,，連續(xù)采集24h后，均勻混合后備用,。

(2) 納污水體取其入口,、中心、出口三個(gè)斷面混合水樣備用,。

(3）以同上方法采集清潔水,，作空白對(duì)照。

濁度大的污水,，需靜置后取上清液,。一般樣品不需加任何處理。水樣按3%比例投加NaCl,，置冰箱備用,。

2) 氣體樣品

以大氣采樣法采取一定體積的大氣樣品，通過(guò)氣體吸收液（(5mL)中吸收，按3％比例投加NaCl,，置冰箱備用,，同法收集清潔空氣作為對(duì)照組。

3) 固體樣品

取固體廢棄物,，按《工業(yè)固體廢棄物有害特性試驗(yàn)與監(jiān)測(cè)分析方法》制備浸出液,，取上清液，按3％比例投加NaCl,，置冰箱備用,。

3．亮發(fā)光桿菌實(shí)驗(yàn)濃度的選擇

在預(yù)備實(shí)驗(yàn)的濃度范圍內(nèi)，按等對(duì)數(shù)間距或百分濃度取3-5個(gè)實(shí)驗(yàn)濃度,，同時(shí)設(shè)空白對(duì)照和參比毒物系列濃度組,。

4．發(fā)光細(xì)菌法生物毒性瀏定

1) 工業(yè)廢水或有毒物質(zhì)的生物毒性測(cè)定

(1) 發(fā)光菌懸液初始發(fā)光度測(cè)定。取4. 9mL 3%NaCl溶液于比色管內(nèi),，加新鮮發(fā)光菌懸液或凍干粉復(fù)蘇菌懸液10μL,，若測(cè)量發(fā)光度在800mV以上，允許置冰浴中備用,。

(2) 取已處理待測(cè)廢水樣品,，按等對(duì)數(shù)間距或百分濃度編號(hào)，并注明采集點(diǎn),。

(3) 按表4-40-1依次加入稀釋液,，待測(cè)水樣及參比毒物系列濃度溶液。

(4) 打開(kāi)生物毒性測(cè)試儀電源,，預(yù)熱15min,，調(diào)零點(diǎn)，備用,。

(5) 每管加入菌懸液10μL,，準(zhǔn)確作用5 min或15min，依次測(cè)定其發(fā)光強(qiáng)度,，記錄毫伏數(shù),。

每個(gè)濃度設(shè)3管重復(fù)。

2) 工業(yè)廢氣（或有害氣體）的生物毒性測(cè)定

(1) 氣體直接通入法,。用注射器直接注入氣體于菌懸液中,，經(jīng)10-20min測(cè)定發(fā)光菌強(qiáng)度的變化。

(2) 氣體吸收法,。方法同工業(yè)廢水測(cè)定法,。

(3) 固體亮發(fā)光桿菌落法。挑選固態(tài)培養(yǎng)對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的發(fā)光菌單菌落,，連同培養(yǎng)基切下,，置比色管內(nèi)，測(cè)定初始發(fā)光強(qiáng)度，然后用注射器將待測(cè)氣體注入菌苔表面,，經(jīng)10-20min后,，測(cè)定發(fā)光度的變化。