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做大鼠ELISA試劑盒的經(jīng)驗(yàn)總結(jié)
1.正式試驗(yàn)時(shí),，應(yīng)分別以陽(yáng)性對(duì)照與陰性對(duì)照控制試驗(yàn)條件,，待檢樣品應(yīng)作一式二份,，以保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性。有時(shí)本底較高,，說(shuō)明有非特異性反應(yīng),，可采用羊血清、大鼠ELISA試劑盒兔血清或BSA等封閉,。
2.在ELISA中,，進(jìn)行各項(xiàng)實(shí)驗(yàn)條件的選擇是很重要的，大鼠ELISA試劑盒其中包括:
（1）固相載體的選擇：許多物質(zhì)可作為固相載體,，如聚氯乙烯,、聚苯乙烯、聚丙酰胺和纖維素等,。其形式可以是凹孔平板,、試管、珠粒等,。目前常用的是40孔聚苯乙烯凹孔板,。不管何種載體，在使用前均可進(jìn)行篩選：用等量抗原包被,，在同一實(shí)驗(yàn)條件下進(jìn)行反應(yīng),，觀察其顯色反應(yīng)是否均一性，據(jù)此判明其吸附性能是否良好,。
（2）包被抗體（或抗原）的選擇：將抗體（或抗原）大鼠ELISA試劑盒吸附在固相載體表面時(shí),，要求純度要好,吸附時(shí)一般要求PH在9.0～9.6之間。吸附溫度,，時(shí)間及其蛋白量也有一定影響,一般多采用4℃18～24小時(shí),。大鼠ELISA試劑盒蛋白質(zhì)包被的zui適濃度需進(jìn)行滴定：即用不同的蛋白質(zhì)濃度（0.1、1.0和10μg／ml等）進(jìn)行包被后,，在其它試驗(yàn)條件相同時(shí),，觀察陽(yáng)性標(biāo)本的OD值。選擇OD值z(mì)ui大而蛋白量zui少的濃度,。對(duì)于多數(shù)蛋白質(zhì)來(lái)說(shuō)通常為1～10μg／ml,。