樣品配置的小妙招：

 1.選用流動相配置對色譜峰影響zui小

 2.流動相溶解度達不到要求時,，盡量選用流動相中含有的比例較大的成分（有待考證）,，以減輕進樣對流動相的影響造成基線不穩(wěn)。

 3.流動相組成溶劑均達不到要求時,，選取的溶劑應保證在設定波長內無紫外吸收,。

  流動相的PH

      如需在一定PH值下操作，須定期測定流動相的PH值,，大氣中的CO2溶解在流動相內將引起PH值的改變,，特別是貯液瓶密閉不嚴時這種影響可能更大。

 更換柱子及流動相

       軟質或半軟質填料的溶脹率隨溶劑極性的變化而變化,，使用新柱時應先用25~30倍柱容積的合適流動相平衡,；更換流動相時，如果兩種流動相不互溶，需采用過渡溶劑使前一種流動相逐步溶解除去,，（例如,，2、2,、4-*基戊烷換成甲醇時,，必須用乙酸已酯或其他溶劑過渡，直到標準物保留值達到穩(wěn)定狀態(tài)）,。

HPLC中流動相的配置必須注意以下幾點：

 流動相的選擇

 流動相的混合

    雙泵主要是在探討流動相的配比或者梯度洗脫是比較方便,，知道確切的液相條件時，建議配好后使用的話,，混合比較均勻,，效果較好。

脫氣

 HPLC所用流動相必須預先脫氣,，否則容易在系統(tǒng)內逸出氣泡,，影響泵的工作。

 系統(tǒng)中氣泡的產生：流動相本身存在,，梯度淋洗混合后放出氣泡,；

 氣泡的影響：存在于管路中，系統(tǒng)壓力不穩(wěn)定,，實驗結果有偏差,；

 存在于單向閥中，易造成液體回流,，流量不準確,，甚至是不吸液；

 存在于檢測器中,，出現(xiàn)鬼峰,，影響檢測準確性。

        所以做液相對流動相的氣泡和雜質要求比較嚴格,。氣泡會影響柱的分離效率,，檢測器的靈敏度、基線穩(wěn)定性,，甚至使無法檢測,。（噪聲增大，基線不穩(wěn),，突然跳動）,。此外，溶解在流動相中的氧還可能與樣品,、流動相甚至固定相（如烷基胺）反應,。溶解氣體還會引起溶劑pH的變化,，對分離或分析結果帶來誤差?！　?/span>

      溶解氧能與某些溶劑（如,，甲醇,、四氫呋喃）形成有紫外吸收的絡合物,，此絡合物會提高背景吸收（特別是在260nm以下），并導致檢測靈敏度的輕微降低,，但更重要的是,，會在梯度淋洗時造成基線漂移或形成鬼峰（假峰）。在熒光檢測中,，溶解氧在一定條件下還會引起淬滅現(xiàn)象,，特別是對芳香烴、脂肪醛,、酮等,。在某些情況下，熒光響應可降低達95%,。在電化學檢測中（特別是還原電化學法）,，氧的影響更大。除去流動相中的溶解氧將大大提高UV檢測器的性能,，也將改善在一些熒光檢測應用中的靈敏度,。

       常用的脫氣方法有：加熱煮沸、抽真空,、超聲,、吹氦等。對混合溶劑,，若采用抽氣或煮沸法,，則需要考慮低沸點溶劑揮發(fā)造成的組成變化。

 1.氦氣脫氣：氦氣脫氣是很有效的脫氣方法,。氦氣緩緩的通過流動相趕去溶入的空氣,，如果使用得當，在10min內可除去80%～90%的溶入氣體,。由于氦氣在流動相中的溶解度極低,，所以用氦氣脫氣保護的流動相可以認為是一個無氣體溶解體系。其缺點是氦氣價格比較昂貴,，會增加檢驗成本,。一般說來有機溶劑中的氣體易脫除，而水溶液中的氣體較頑固,。在溶液中吹氦是相當有效的脫氣方法,，這種連續(xù)脫氣法在電化學檢測時經(jīng)常使用,。但氦氣昂貴，難于普及,。

 2.真空脫氣：也是比較常用的脫氣方法?，F(xiàn)在多數(shù)企業(yè)都zui常用這種辦法，貯液器被抽成部分真空,，溶入的氣體蒸發(fā)形成氣泡溢出,，其效果僅次于氦氣脫氣。象Agileng1200液相色譜使用的是在線脫氣機,。在線脫氣只適合脫完氣之后的流動相,，在使用過程中的微量脫氣。

 3.超聲波脫氣：將配制好的流動相連容器放入超聲水槽中脫氣10～20min,。這種方法比較簡便,，又基本上能滿足日常分析操作的要求，所以,，目前仍廣泛采用,。這種方法只能除去30%的溶解氣體，有時還會引起氣體溶解度的增加,。對氧敏感的檢測器不宜用此法,。

 4.加熱回流脫氣：該方法雖然效果很好，但是適用范圍較窄,。對于有機溶劑或混合流動相不適合用此法,，因為揮發(fā)性組分會損失掉，改變流動相的組成,。

      綜合來說,，用真空抽濾后，再用超聲脫氣還是zui常用的辦法,，用氦氣的方法是效果的辦法,，而在線脫氣本身也是真空脫氣，但它可以放到儀器上使用,，是一種保證性的辦法,。

 A.離線（系統(tǒng)外）脫氣法不能維持溶劑的脫氣狀態(tài)，在你停止脫氣后,，氣體立即開始回到溶劑中,。在1~4小時內，溶劑又將被環(huán)境氣體所飽和,。

 B.在線（系統(tǒng)內）脫氣法無此缺點,。zui常用的在線脫氣法為鼓泡，即在色譜操作前和進行時,，將惰性氣體噴入溶劑中,。嚴格來說,，此方法不能將溶劑脫氣，它只是用一種低溶解度的惰性氣體（通常是氦）將空氣替換出來,。此外還有在線脫氣機,。