流式細(xì)胞儀可同時(shí)進(jìn)行多參數(shù)測(cè)量,，信息主要來(lái)自特異性熒光信號(hào)及非熒光散射信號(hào),。測(cè)量是在測(cè)量區(qū)進(jìn)行的，所謂測(cè)量區(qū)就是照射激光束和噴出噴孔的液流束垂直相交點(diǎn),。液流中央的單個(gè)細(xì)胞通過(guò)測(cè)量區(qū)時(shí),，受到激光照射會(huì)向立體角為2π的整個(gè)空間散射光線，散射光的波長(zhǎng)和入射光的波長(zhǎng)相同,。散射光的強(qiáng)度及其空間分布與細(xì)胞的大小,、形態(tài)、質(zhì)膜和細(xì)胞內(nèi)部結(jié)構(gòu)密切相關(guān),，因?yàn)檫@些生物學(xué)參數(shù)又和細(xì)胞對(duì)光線的反射,、折射等光學(xué)特性有關(guān)。未遭受任何損壞的細(xì)胞對(duì)光線都具有特征性的散射,，因此可利用不同的散射光信號(hào)對(duì)不經(jīng)染色活細(xì)胞進(jìn)行分析和分選,。經(jīng)過(guò)固定的和染色處理的細(xì)胞由于光學(xué)性質(zhì)的改變，其散射光信號(hào)當(dāng)然不同于活細(xì)胞,。散射光不僅與作為散射中心的細(xì)胞的參數(shù)相關(guān),，還跟散射角、及收集散射光線的立體角等非生物因素有關(guān),。在流式細(xì)胞術(shù)測(cè)量中,，常用的是兩種散射方向的散射光測(cè)量:
?、偾跋蚪?即0角)散射(FSC);
②側(cè)向散射(SSC),，又稱90角散射,。這時(shí)所說(shuō)的角度指的是激光束照射方向與收集散射光信號(hào)的光電倍增管軸向方向之間大致所成的角度。一般說(shuō)來(lái),，前向角散射光的強(qiáng)度與細(xì)胞的大小有關(guān),，對(duì)同種細(xì)胞群體隨著細(xì)胞截面積的增大而增大;對(duì)球形活細(xì)胞經(jīng)實(shí)驗(yàn)表明在小立體角范圍內(nèi)基本上和截面積大小成線性關(guān)系;對(duì)于形狀復(fù)雜具有取向性的細(xì)胞則可能差異很大,，尤其需要注意,。側(cè)向散射光的測(cè)量主要用來(lái)獲取有關(guān)細(xì)胞內(nèi)部精細(xì)結(jié)構(gòu)的顆粒性質(zhì)的有關(guān)信息。側(cè)向散射光雖然也與細(xì)胞的形狀和大小有關(guān),，但它對(duì)細(xì)胞膜,、胞質(zhì)、核膜的折射率更為敏感,，也能對(duì)細(xì)胞質(zhì)內(nèi)較大顆粒給出靈敏反映,。熒光信號(hào)主要包括兩部分:
①自發(fā)熒光,，即不經(jīng)熒光染色,，細(xì)胞內(nèi)部的熒光分子經(jīng)光照射后所發(fā)出的熒光;
②特征熒光,，即由細(xì)胞經(jīng)染色結(jié)合上的熒光染料受光照而發(fā)出的熒光,，其熒光強(qiáng)度較弱，波長(zhǎng)也與照射激光不同,。自發(fā)熒光信號(hào)為噪聲信號(hào),，在多數(shù)情況下會(huì)干擾對(duì)特異熒光信號(hào)的分辨和測(cè)量。在免疫細(xì)胞化學(xué)等測(cè)量中,，對(duì)于結(jié)合水平不高的熒光抗體來(lái)說(shuō),，如何提高信噪比是個(gè)關(guān)鍵。一般說(shuō)來(lái),，細(xì)胞成分中能夠產(chǎn)生的自發(fā)熒光的分子(例核黃素,、細(xì)胞色素等)的含量越高，自發(fā)熒光越強(qiáng);培養(yǎng)細(xì)胞中死細(xì)胞/活細(xì)胞比例越高,，自發(fā)熒光越強(qiáng);細(xì)胞樣品中所含亮細(xì)胞的比例越高,，自發(fā)熒光越強(qiáng)。
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