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ELISA試劑盒做標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品檢測時(shí)需要注意:
1)設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品的標(biāo)準(zhǔn)濃度范圍要有一個(gè)比較大的跨度,,并且要能涵蓋你所要檢測實(shí)驗(yàn)樣品的濃度,,2)即樣品的濃度要在標(biāo)準(zhǔn)曲線濃度范圍之內(nèi),包括上限和下限,,而對(duì)于呈S型的標(biāo)準(zhǔn)曲線,,盡量要使實(shí)驗(yàn)樣品的濃度在中間坡度zui陡段,即曲線幾乎成直線的范圍內(nèi),。
2)樣品的濃度等指標(biāo)是根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算出來的,,所以首先要把做標(biāo)準(zhǔn)曲線看作是比做正式實(shí)驗(yàn)還要重要的一件事,否則后面的實(shí)驗(yàn)結(jié)果無從談起,。
3)用倍比稀釋法配制標(biāo)準(zhǔn)曲線中的標(biāo)準(zhǔn)樣品濃度,,這樣就能夠保證標(biāo)準(zhǔn)樣品的濃度不會(huì)出現(xiàn)較大的偏離。
4)檢測標(biāo)準(zhǔn)樣品時(shí),,應(yīng)按濃度遞增順序進(jìn)行,,以減少高濃度對(duì)低濃度的影響,,提高準(zhǔn)確性。
5)標(biāo)準(zhǔn)曲線的樣品數(shù)一般為7個(gè)點(diǎn),,但至少要保證有5個(gè)點(diǎn),。
6)做出的標(biāo)準(zhǔn)曲線相關(guān)系數(shù)因?qū)嶒?yàn)要求不同而有所變動(dòng),但一般來說,,相關(guān)系數(shù)R至少要大于0.98,,對(duì)于有些實(shí)驗(yàn),至少要0.99甚至是0.999,。
ELISA試劑盒浸泡式洗滌方式步驟:
(1)吸干或甩干孔內(nèi)反應(yīng)液,;
(2)用洗滌液過洗一遍(將洗滌液注滿板孔后,即甩去),;
(3)浸泡,,即將洗滌液注滿板孔,放置1-2分鐘,,間歇搖動(dòng),,浸泡時(shí)間不可隨意縮短;
(4)吸干孔內(nèi)液體,,吸干應(yīng)*,,可用水泵或真空泵抽吸,也可甩去液體后在清潔毛巾或吸水紙上拍干,;
(5)重復(fù)操作c和d,,洗滌3-4次(或按說明規(guī)定),如本底較高,,可增加洗滌次數(shù)或延長浸泡時(shí)間,。
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