刀豆蛋白A(Con A)誘導的小鼠肝炎模型

刀豆蛋白A(Con A)是一種被廣泛應用可活化 T 細胞的有絲分裂原,，依賴于輔助性T淋巴細胞(Th)及巨噬細胞發(fā)揮效應,，ConA活化T淋巴細胞，刺激Th細胞及巨噬細胞產(chǎn)生TNF -α和IFN Y等細胞因子,。TNF -α可直接損傷肝細胞,，導致肝細胞凋亡。Con A誘導的小鼠肝損傷實驗動物模型,， 其病理特點主要是通過活化 T 淋巴細胞而致免疫性肝損傷,。 Con A 靜脈注射小鼠體內(nèi)后，大部分在肝臟內(nèi)聚集,，表明肝臟是Con A 體內(nèi)誘導毒性的靶器官,。在病毒性肝炎的炎癥發(fā)生過程中，淋巴細胞介導的細胞毒作用是導致病毒感染肝實質細胞溶解的主要免疫機理,，而淋巴細胞與抗原遞呈細胞及產(chǎn)生抗原的靶細胞間的粘附,，是免疫反應過程所必需的重要步驟.

1.實驗動物

SPF級Balb/C小鼠，雄性,，周齡為8w-10w,，體重為30g-35g。

2.實驗分組

實驗分六組：正常對照組,、模型組,、陽性藥組、受試藥組三個劑量組,，每組15只動物,。

3.主要試劑

刀豆蛋白A

4.實驗周期

    6h

5.建模方法

ConA誘導小鼠肝損傷模型的建立：ConA溶于0.01 mol/L PBS，配成濃度為4mg/ml,，以20mg/kg的劑量自小鼠尾靜脈注射1次,，在6 h處死小鼠，同時設立PBS尾靜脈注射的PBS對照組,。所有小鼠標準飼料飼養(yǎng),， 自由攝食及飲水。

6.模型的評價

1. ConA誘導免疫性肝損傷小鼠ALT,、AST及MPO的影響：

術后6h,，摘眼球取血，室溫靜止2h,， 4℃離心機3000r/min離心10min，分離出上層血清，置-80℃冰箱保存?zhèn)溆?。與正常組比較,，模型組血清ALT、AST及MPO均明顯升高,。

2. ConA誘導免疫性肝損傷小鼠肝臟組織學的影響

取一肝葉,，以4%多聚甲醛溶液固定，常規(guī)石蠟包埋切片,，觀察病理學改變,。正常組肝小葉結構完整，肝細胞以中央靜脈為中心呈放射狀排列,。模型組肝細胞索排列紊亂,，肝竇淤血較普遍，肝小葉內(nèi)大多數(shù)肝細胞腫脹,，肝組織可見匯管區(qū)纖維間隔形成,，可見明顯的點狀壞死和灶狀壞死，壞死灶內(nèi)可見大量中性粒細胞,，淋巴細胞和單核細胞浸潤,，廣泛肝細胞嗜酸性變、空泡變,、脂肪變,。

   3. 細胞因子的檢測

肝臟損傷后，血清中TNFα,、IFNγ,、IL-2、IL-6,、ICAM1等細胞因子的表達顯著升高,，可以用ELISA 法檢測。