ELISA試劑盒有哪些操作應用領域
ELISA法具有靈敏,、特異,、簡單、快速,、穩(wěn)定及易于自動化操作等特點,。不僅適用于臨床標本的檢查,，而且由于一天之內(nèi)可以檢查幾百甚至上千份標本,因此，也適合于血清流行病學調(diào)查,。ELISA法是免疫診斷中的一項新技術,，現(xiàn)已成功地應用于多種病原微生物所引起的傳染病、寄生蟲病及非傳染病等方面的免疫診斷,。也已應用于大分子抗原和小分子抗原的定量測定,，根據(jù)已經(jīng)使用的結果，本法不僅可以用來測定抗體,，而且也可用于測定體液中的循環(huán)抗原,，所以也是一種早期診斷的良好方法。因此ELISA法在生物醫(yī)學各領域的應用范圍日益擴大,，可概括四個方面：
1,、免疫酶染色各種細胞內(nèi)成份的定位。
2,、研究抗酶抗體的合成,。
3、顯現(xiàn)微量的免疫沉淀反應,。
4,、定量檢測體液中抗原或抗體成份。
 
操作流程如下：
（1）待測樣品孔中每孔加入待測樣品100μl,，每種樣品設3個平行孔,；設兩個陰性對照孔，每孔加未處理組的細胞裂解液100μl,；另設一個空白對照孔,，加入純細胞裂解液100μl。 （2）酶標板置4℃,，包被一夜,。
（3）洗板：吸干孔內(nèi)反應液，用洗滌液過洗一遍（將洗滌液注滿板孔后,，即甩去）,，之后將洗滌液注滿板孔，浸泡1-2分鐘,，間歇搖動,。甩去孔內(nèi)液體后在吸水紙上拍干。重復洗滌3-4次,。
（4）陰性對照孔每孔加入PBS 50μl,，樣品孔及空白孔每孔加入1：500稀釋的兔抗人AIF抗體工作液50μl。
（5）酶標板置37℃培養(yǎng)箱的濕盒內(nèi),，孵育60min,。
（6）洗板,，同（4）。
（7）每孔加1：5000稀釋的HRP-標記的山羊抗兔抗體工作液 100μl,。
（8）酶標板置37℃培養(yǎng)箱的濕盒內(nèi),，孵育60min。
（9）洗板,，同（4）,。
（10）每孔加TMB顯色液 100μl，輕輕混勻10s,，置37℃暗處反應15-20min,。
（11）每孔加100μl 2mol/L H2SO4終止反應。
（12）分別測450nm 吸光值W1和630nm吸光值W2,，zui終測得的OD值為兩者之差（W1-W2）,，以減少由容器上的劃痕或指印等造成的光干擾。
（13）數(shù)據(jù)處理：在得出標本（S）和陰性對照（N）的 OD值后,，計算S/N值,。S/N≥2.1為陽性判定標準。
注：所用溶液配方
(1) PBS：稱取0.2g KH2P04, 2.9g Na2HP04?12H20,、8.0g NaCl, 0.2g KCl,，加雙蒸水至1000ml。
（2）包被緩沖液：稱取1.59g Na2CO3, 2.938 NaHCO3,，加雙蒸水至 1000m1,。
（3）洗滌液(PBST)：含0.05% Tween-20的PBS。
（4）稀釋液：含0.1%牛血清白蛋白(BSA)的PBS,，主要用以稀釋抗體,、標準品、樣品,。
（5）TMB顯色液：稱取1.84g Na2HP04.12H20, 0.51 g檸檬酸,，加雙蒸水至1O0ml，配成檸檬酸-磷酸緩沖溶液,。用10.5 ml 檸檬酸-磷酸緩沖溶液溶解1錠TMB,，再加入35μl 3% H2O2
（6）細胞裂解液：1% TritonX-100，137mmol/L NaCl,，20mmol/L Tris-HCl,，2mmol/L EDTA，1mmol/L PMSF,，pH 7.4,。（其中PMSF溶于異丙醇中，配成1O mmo/L,，-20℃ 貯存?zhèn)溆谩?br />