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1.氨基柱既可以正相使用,,也可以反相使用,但是要注意到的是:正相溶劑和反相溶劑往往是不互溶的,,正常情況新氨基柱保存在正相環(huán)境中,,例如LUNA 氨基柱保存在正己烷-乙腈(99:1)中。
2. 正相使用
2.1 新柱子可直接用流動相,。推薦先用正己烷-乙腈(99:1)以0.5ml/min的流速沖10倍柱體積,,再根據(jù)流動相選用極性相近的二氯甲烷以相同的流速沖10倍柱體積,zui后換成流動相,。
2.2 正相使用時,,不宜分析含醛基、羰基的化合物,,不可用于還原糖的分析,;流動相要*脫氣,并不得含有羰基化合物和過氧化物(質(zhì)量不好的四氫呋喃含有少量),。
2.3 任何時候更換流動相時都要確保新流動相與柱子原保存液可互溶,。
3 反相使用
3.1 先用正己烷-乙腈(99:1)以0.5ml/min的流速沖10倍柱體積,再依次以相同的流速相同的用量用異丙醇,、甲醇,、甲醇-水(50:50)沖柱子。
3.2 以0.5ml/min的流速用30倍柱體積的pH11.0的(LUNA)水溶液沖柱子(注意pH值切不可超過11.0),,立即用水(0.5ml/min的流速,,30倍柱體積)沖洗,再換成流動相,。
3.3 配制流動相時,,應(yīng)各組分分別量取,比例較小的組分要精密量取,,需調(diào)pH值時要精密到0.1,。
3.4 反相條件下使用時,要特別注意控制pH值范圍,pH值越低越有發(fā)生水解的危險,,流動相中水的比例越高當(dāng)然也越有發(fā)生水解的危險,。的pH范圍在pH 3.0-7.0
3.5 如果要使用的流動相中還含有緩沖鹽類,建議在用分析流動相之前,,先用不含緩沖鹽的同比例流動相過渡,,這樣可避免緩沖鹽在分析柱內(nèi)的析出。
3.6 有一種情況是,,當(dāng)使用氨基柱進(jìn)行酸性物質(zhì)的分析時,,酸性物質(zhì)的存在意味著質(zhì)子的存在,可能會使略帶負(fù)電荷的氨基官能團(tuán)質(zhì)子化,,導(dǎo)致使用一段時間后對于某些類的分析物保留性質(zhì)有所改變或表現(xiàn)在柱效下降,。建議:用5-10倍的柱體積的含0.5-1.0%NH3的乙腈-水(50:50)溶液沖洗該柱(沖洗后當(dāng)然要再用不含堿的流動相洗去多余氨),之后再進(jìn)行分析這類酸性分析物時建議在流動相中略微添加少許氨如0.1%,。
4 色譜柱的沖洗:簡單說起來,,正相條件下使用的氨基柱就參照硅膠柱的清洗方法;反相條件下使用的氨基柱就參照C18的清洗方法,。
5 色譜柱的保存
5.1 正相使用時,,將柱子沖洗干凈后,用正己烷-乙腈(99:1)保存,。
5.2 反相使用時,,如短期不用,可用甲醇或乙腈保存,;長期不用時需將甲醇依次用異丙醇置換,,zui后用正己烷保存。
6 色譜柱的再生
6.1 方案1:依次用甲醇,、異丙醇,、正己烷、異丙醇,、甲醇沖柱子(各以0.5ml/min的流速,,20倍柱體積),再換流動相,。這些清洗方法,,主要是針對當(dāng)樣品中有雜質(zhì)逐步吸附累積到填料上時的處理方法,色譜柱表現(xiàn)行為為諸如柱壓增高柱效降低等,。
6.2 方案2:NH2柱用于反相條件時,,NH2鍵會水解,尤其是在該柱子pH范圍以外,,在酸性和堿性條件下柱壽命會下降很快,,如果在這個條件下使用需要清洗一下,,需要用10倍柱體積溶液沖洗,如下:
95%水/5%乙腈
THF四氫呋喃
95%乙腈/5%水
并保持95%乙腈/5%水繼續(xù)沖洗,,以低流速0.2-0.5mL/min沖洗,。
6.3 方案3:柱子使用一定時間后,柱效下降,,老化,,也可清洗一下柱子恢復(fù)柱性能,清洗時依次用10倍柱體積的下列溶液沖洗:
95%水/5%乙腈
THF四氫呋喃
95%乙腈/5%水
再走流動相即可
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