A. 液相試劑要求

試劑如甲醇,，乙腈必須為色譜級(jí)純,，其他試劑也盡量使用色譜級(jí)純，試劑標(biāo)簽上都會(huì)標(biāo)有色譜級(jí)或HPLC等字樣,。水為超純水或者直接購買質(zhì)量有保證的純凈水,。

B. 流動(dòng)相配置注意事項(xiàng)

一般來說，溶劑的混合按體積比（V/V）或重量比（W/W）進(jìn)行,。溶液的體積因溫度而變化,，所以按重量比混合配置流動(dòng)相，樣品測(cè)定的重復(fù)性較好,，但是操作繁瑣,，通常多為體積混合。

體積混合有三種方式,，例如50%乙腈水溶液：

方式（1）：可以用量筒量取乙腈500ml,，再量取水500ml，兩種液體在瓶?jī)?nèi)充分搖晃混合,。

方式（2）：可以先取500ml乙腈到1L容量瓶中然后用水定容,。

方式（3）：可以先取500ml水到1L容量瓶中然后用乙腈定容。

這三種方式配置得到的流動(dòng)相組成都是不同的,，即使不考慮其他方面因素,，保留時(shí)間也不會(huì)相同,。一般情況推薦使用方式（1）來配置流動(dòng)相,。

C. 含緩沖鹽流動(dòng)相的配制需注意的問題

配置緩沖鹽使用的鹽試劑也盡量使用色譜級(jí)純，稱樣要,，為了達(dá)到要求,，選用合適量程的天平且每天使用前對(duì)天平校正。按要求配置好以后必須通過0.45μm或0.22μm濾膜過濾并超聲脫氣20min以上,。

注意：緩沖鹽要臨用新配,。

D. 何時(shí)調(diào)節(jié)流動(dòng)相pH值

采用反相色譜法分離弱酸（3≤pKa≤7）或弱堿（7≤pKa≤8）樣品時(shí)，通過調(diào)節(jié)流動(dòng)相的pH值,，以抑制樣品組分的解離,，增加組分在固定相上的保留，并改善峰形的技術(shù)稱為反相離子抑制技術(shù),。

（1）對(duì)于弱酸,，流動(dòng)相的pH值越小，組分的k值越大,，當(dāng)pH值遠(yuǎn)遠(yuǎn)小于弱酸的pKa值時(shí),，弱酸主要以分子形式存在,；分析弱酸樣品時(shí)，通常在流動(dòng)相中加入少量弱酸,，常用50mmol/L磷酸鹽緩沖液和1%醋酸溶液,。

（2）對(duì)于弱堿，情況相反,。分析弱堿樣品時(shí),，通常在流動(dòng)相中加入少量弱堿，常用50mmol/L磷酸鹽緩沖液和30mmol/L三乙胺溶液,。

流動(dòng)相中加入有機(jī)胺可以減弱堿性溶質(zhì)與殘余硅醇基的強(qiáng)相互作用,，減輕或消除峰拖尾現(xiàn)象。所以在這種情況下有機(jī)胺（如三乙胺）又稱為減尾劑或除尾劑,。

注意：PH的調(diào)節(jié)不可超出色譜柱的PH耐受范圍,。