ABC-ELISA免疫標記技術

借助親和素之間*的親和力,，至少要比抗原和抗體之間的結合高1萬被,，且兩者結合迅速而穩(wěn)定，故用于免疫標記技術中,，可提高檢測靈敏度,，并可縮短反應時間。在包被寄生蟲抗原的反應板凹孔中,，加寄生蟲感染者血清后,，即形成抗原-抗體復合物，再加生物素標記的羊抗人IgG(Biotin-IgG),即與復合物相結合,，再加ABC復合物（親和素-生物素-酶結合物）,，即可biotin-IgG相結合,，zui后用相應底物進形顯色反應后，用分光光度計測定消光值,，即可判讀反應結果,。

抗原制備 參考免疫酶測定法部分的抗原制備方法。

生物素標記羊抗人IgG 羊抗人IgG 血清經(jīng)50%和33%飽和硫酸銨各鹽析一次,，收集γ球蛋白部分,，透析后測定蛋白質含量。林用錢,，用0.1mol/L NaHCO3配成1mg/ml 濃度。將生物素用N-羥基丁二酰亞胺進行酯化反應,，使稱為酯化生物素,，然后用二甲基甲酰胺配成10mg/ml濃度以每mg抗球蛋白加0.2-0.4mg酯化生物素的比例，將酯化生物素二甲基甲酰胺溶液加入于羊抗IgG中,，震蕩10min,，置于是穩(wěn)中3-4h，然后用PBS透析24h,，多次換液后,，即為生物素標記物，保存?zhèn)溆谩?/span>

生物素標記辣根過氧化物酶  案上訴生物素標記羊抗人IgG方法,，制備生物素標記沒

ABC溶液配制 在圖文-PBS中,，分別加入avidin和HRP-Bio,使各自的zui終濃度為8-12ug/ml和3-4ug/ml，置室溫中混勻20-30min,，即可應用,，通常在臨用前30min配制。

在以包被抗原的40孔反應板凹孔中,，加待測血清,，如ELISA法孵育、洗滌后,，加biotin-IgG如賞罰孵育,，洗滌、再加ABC洗滌,，于37℃經(jīng)15min,，洗滌后加底物（鄰苯二胺OPD),置37℃經(jīng)10-15min，zui后用2mol/L H2SO4終止反應,，用酶標檢測儀測定OD值,，檢測時每一樣本做2分，求得均值,。

以健康人測得的OD均值,，加2個標準差作為標準值(N0.求每一受檢驗本的OD值（P)與N值的比值,。以P/N≥1.5-2.0，作為陽性,，否則為陰性,。

?返回zui上層