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DAN數(shù)據(jù)分析
數(shù)據(jù)分析是個(gè)牽涉面較廣的問題,。不同類型的實(shí)驗(yàn)結(jié)果,有不同的分析方法,;同一類型的實(shí)驗(yàn),,也有不同的分析方法。如對DNA直方圖的定量似合分析,,上有7大類計(jì)算機(jī)似合程序,。在此,我們不可能對各種分析方法一一介紹,,而只是介紹某些典型方法,。
數(shù)據(jù)分析方法可分成非參數(shù)方法和參數(shù)方法兩大類。非參數(shù)方法對顯示的圖形不需作任何假定,,也不要數(shù)學(xué)模型,。有時(shí),這個(gè)方法很直觀,,簡單,;但在需要一道對一道地比較兩個(gè)或更多個(gè)直方圖時(shí),它又變得較復(fù)雜,。參數(shù)方法是指被測量的生物學(xué)系統(tǒng),、細(xì)胞群體等等,能為一個(gè)數(shù)學(xué)模型所描述并表達(dá)成一個(gè)方程或方程組,,用方程的變量可由被測的數(shù)據(jù)中提取有用的信息,。例如對小鼠的精子DNA含量進(jìn)行測量,結(jié)果得一尖銳的峰,,如果可用正態(tài)分布描述全部數(shù)據(jù),,則參數(shù)是峰下的面積,平均值和方差,。當(dāng)然,,zui終還要用zui小二乘方的方法來擬合數(shù)據(jù)。
非參數(shù)分析
非參數(shù)分析常用于單參數(shù)直方圖的定量分析,圖是zui簡單的分析例子,。
此圖是人白細(xì)胞用吖啶橙染色后的直方圖,,圖上有3個(gè)峰,從左到右依次是淋巴細(xì)胞,、單核細(xì)胞和粒細(xì)胞,。如果要計(jì)算各部分所占的百分比,只要計(jì)算3個(gè)峰下的面積即可,。實(shí)際上,,可在淋巴細(xì)胞的峰與單核細(xì)胞的峰之間的“谷”zui低處,人為的作一直線,,垂直于橫坐標(biāo),;在單核細(xì)胞與粒細(xì)胞間的“谷”的zui低處,再做一直線,,3個(gè)峰各由直線為界,,逐道計(jì)算峰下的細(xì)胞術(shù)并與總細(xì)胞相比,則可分別得出淋巴細(xì)胞,、單核細(xì)胞,、粒細(xì)胞在整個(gè)群體中所占百分?jǐn)?shù)。
在上述定量分析中,,我們即沒有使用任何數(shù)學(xué)模型,,也沒有引入任何變量,所以屬于非參數(shù)定量分析方法,,也可稱為直觀分析法,。
DNA直方圖的比較分析
由于流式細(xì)胞術(shù)常測量DNA直方圖,因此,,我們再討論一下另外一種定量分析方法,。我們常會(huì)遇到比較兩個(gè)直方圖的場合。例如一個(gè)是對照組另一個(gè)是實(shí)驗(yàn)組,,或者一個(gè)是零時(shí)刻,,另一個(gè)是某實(shí)驗(yàn)時(shí)刻等等。圖所示是這種方法的一個(gè)應(yīng)用實(shí)例,。
中國藏書卵巢細(xì)胞CHO分別用Hoechst 33258及Propidium Iodide對DNA染色,,然后經(jīng)流式細(xì)胞計(jì)測量。為使測量結(jié)果更有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,,對同一樣品應(yīng)進(jìn)行多次,,例如10次的測量,然后取平均值,,于是得到兩個(gè)直方圖,。將兩圖歸一化,,即將G1峰的位置調(diào)節(jié)到相同倒數(shù)上,然后將兩個(gè)圖畫在一起,,即圖。其中實(shí)線是Hoechst 33258染色的,,三角形是PI染色的,。圖中每條曲線的總細(xì)胞也要?dú)w一化到相同數(shù)值。
從圖上我們不難得出,,在G2M峰有較明顯的差異,。33258染色的細(xì)胞,其G2M部分所占比例較大,。如果將兩條曲線逐道相減,,既得圖,在這個(gè)HO-PI圖中,,G1峰對應(yīng)的100道附近為正,,可見33258染色的G1峰較PI染色的G1峰更為尖銳。S期部分PI略高一些,,差異不大,。實(shí)際大約相差13%。上述方法還可進(jìn)一步發(fā)展,,采用Kolmogorov-Smirnov檢驗(yàn)或Gossett-T檢驗(yàn),,有人曾用來識別人外周血的兩個(gè)淋巴類型。
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