微量法 100T/96S

注意：正式測定之前選擇2-3個預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測定,。

測定意義：

亞硝酸鹽廣泛存在于水體和土壤中，不僅是有機(jī)氮分解的重要中間產(chǎn)物,，也可能來自污染,。人體攝入過量后，可誘發(fā)消化系統(tǒng)癌變,。

測定原理：

在酸性條件下,，亞硝酸鹽與對氨基苯磺酸反應(yīng)生成重氮化合物，再與 N-1-萘基乙二胺形成紫紅色偶氮化合物,，在540nm處有特征吸收峰,。

自備實(shí)驗(yàn)用品及儀器：

天平、常溫離心機(jī),、可見分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀,、微量石英比色皿/96 孔板、蒸餾水,。

試劑組成和配制：

提取液：液體 100mL×2 瓶,，室溫保存。

試劑一：液體 10mL×1 瓶,，4℃避光保存,。

試劑二：液體 10mL×1 瓶，4℃避光保存,。

樣品處理：

1.土壤樣品：準(zhǔn)確稱取過篩后的土壤約0.2g,，加入 1.5 mL 提取液，室溫震蕩 1h,，8000g,， 25℃離心 15min，靜置,，待其分層后,，取上清液待測,。

2.水樣：直接檢測；如果渾濁,，可以離心后再測定,。

測定步驟和操作表：

1、 分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀預(yù)熱 30min,，調(diào)節(jié)波長至 540nm,，蒸餾水調(diào)零。

2,、 操作表

注意：空白管只需測定一次,。

亞硝酸鹽含量計(jì)算：

a. 用微量石英比色皿測定的計(jì)算公式如下

標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程為：y=0.234x + 0.0002，R2= 0. 999 

x 為標(biāo)準(zhǔn)品亞硝酸鈉濃度（μg/ml）                    

y為吸光值A,。

（1）土壤樣品

 NO2-（μg/g）=（△A-0.0002）÷0.234×V 樣÷（V 樣÷V 樣總×W）×0.6668

=（A – 0.086）÷0.234×1.5×0.6668÷W

=4.27×（△A-0.0002）÷W

（2）水樣

NO2-（μg/g）=（△A-0.0002）÷0.234×0.6668

=2.85×（△A-0.0002）

V 樣總：加入提取液體積,，1.5 mL； V 樣：反應(yīng)中樣品體積,，0.07mL,；W：樣品質(zhì)量，g,。

b. 用 96 孔板測定的計(jì)算公式如下

標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程為：y=0.141x +0.0002,，R2= 0. 9991 x 為標(biāo)準(zhǔn)品亞硝酸鈉濃度（μg/ml）

y 為吸光值A(chǔ),。

（1）土壤樣品

NO2-（μg/g ）=（△A-0.0002）÷0.141×V 樣÷（V 樣÷V 樣總×W）×0.6668

=（△A-0.0002）÷0.141×1.5×0.6668÷W

=7.09×（△A-0.0002）÷W

（2）水樣

 NO2-（μg/g）=（△A-0.0002）÷0.141×0.6668

=4.73×（△A-0.0002）

V 樣總：加入提取液體積,，1.5 mL； V 樣：反應(yīng)中樣品體積,，0.07mL,；W：樣品質(zhì)量，g,。

注意事項(xiàng)：

1.試劑盒 2-8℃保存,。

2.試劑對人體有一定的危害，請穿實(shí)驗(yàn)服,，戴手套操作,。

3.若檢測出得OD值在標(biāo)準(zhǔn)曲線范圍外，請將樣品進(jìn)行適當(dāng)?shù)臐饪s或稀釋（A540 <0.09 濃縮,，A540 > 1.5 適當(dāng)稀釋）,。

4.低檢出限為 0.5μg/g