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當(dāng)前位置:青島捷世康生物科技有限公司>>技術(shù)文章>>蘇木素伊紅(HE)染色液套裝(含分化液)說明書
產(chǎn)品簡介:
蘇木素伊紅(HE)染色液套裝(含分化液)中蘇木素染色液采用 自主研發(fā)的配方,由進口的高純度蘇木精,、氧化劑等組成,,不含甲醇等有害物質(zhì),對細(xì)胞核染色效果好,,其特點是不易產(chǎn)生沉淀和金屬膜,;應(yīng)用范圍廣,可以用于人,、動物,、畜牧、 水產(chǎn)等領(lǐng)域,,可以用于組織石蠟切片,、冰凍切片和組織細(xì)胞的染色等。蘇木素染色液和伊紅染色液均可以重復(fù)使用,。該產(chǎn)品僅用于科研領(lǐng)域,,不宜用于臨床診斷或其他用途。
染色原理:
1,、細(xì)胞核染色原理:蘇木素為堿性天然染料,,可使細(xì)胞核著色,,細(xì)胞核內(nèi)染色質(zhì)的成分主 要是 DNA,在 DNA 雙螺旋結(jié)構(gòu)中兩條核苷酸鏈上的磷酸基向外,,使 DNA 雙螺旋的外側(cè)帶負(fù)電荷,,呈酸性,很容易與帶正電荷的蘇木素堿性染料以離子鍵或氫鍵結(jié)合而被染色,。蘇 木素在堿性溶液中呈藍色,,所以細(xì)胞核被染成藍色。
2,、細(xì)胞漿染色原理:伊紅是一種化學(xué)合成的酸性染料,,在一定條件下可使細(xì)胞漿著色,細(xì) 胞漿的主要成分是蛋白質(zhì),,為兩性化合物,,細(xì)胞漿的染色與染液的 pH 值密切相關(guān),當(dāng)染色液 pH 值在胞漿蛋白質(zhì)等電點(4.7~5.0)以下時,,胞漿蛋白質(zhì)以堿式電離,,則細(xì)胞漿帶正電荷,就可被帶負(fù)電荷的酸性染料染色,。伊紅在水中離解成帶負(fù)電荷的陰離子,,與胞漿蛋白質(zhì) 帶正電荷的陽離子結(jié)合,使細(xì)胞漿著色,,呈現(xiàn)紅色,。
3、分化作用:染色后,,用某些特定的溶液將組織過多結(jié)合的染色劑脫去,,這個過程稱為分 化作用,所用的溶液稱為分化液,。在 HE 染色中常用 0.5-1%鹽酸乙醇作為分化液,,因酸能破壞蘇木素的醌型結(jié)構(gòu),使組織與色素分離而退色,。大多數(shù)組織經(jīng)蘇木素染色后,,必須用鹽 酸乙醇分化,使細(xì)胞核過多結(jié)合的蘇木素染料和細(xì)胞漿吸附的蘇木素染料脫去,,再進行伊紅 染色,,才能保證細(xì)胞核與細(xì)胞漿染色的分明,。
4,、返藍作用:分化之后,蘇木素在酸性條件下處于紅色離子狀態(tài),,呈紅色,;在堿性條件下處于藍色離子狀態(tài),,呈藍色。組織切片經(jīng)酸性乙醇分化后呈紅色或粉紅色,,立即用水除
去組織切片上的酸而中止分化,,再用弱堿性水使蘇木素染上的細(xì)胞核呈現(xiàn)藍色,這個過程稱為返藍作用或藍化作用,,另外用自來水(尤其是溫水)浸洗也可使細(xì)胞核返藍,,但所需時間較長。
自備材料:
1,、二甲苯或浸蠟脫蠟透明液,、系列乙醇、返藍液,、自來水或蒸餾水
2,、乙醇混合固定液、4%多聚甲醛,、中性樹膠或環(huán)保封片膠
操作步驟(僅供參考):
(一)石蠟切片染色
1,、切片脫蠟至水
①二甲苯或浸蠟脫蠟透明液(DZ2011)作用 2 次,每次 5~10min,。
②(可選)無水乙醇作用 2 次,,每次 3~5min。
③95%乙醇 3~5min
④90%乙醇 3~5min
⑤80%乙醇 3~5min
⑥自來水或蒸餾水(亦可用 30~40℃溫水)沖洗 1~3min
2,、染色
①蘇木素染色液染色 3~8min
②自來水或蒸餾水沖洗 5~10s
③酸性乙醇分化 2~5s
④自來水沖洗 20~30s
⑤返藍液或溫水返藍 20~40s
⑥自來水沖洗 30~60s
⑦伊紅染色液(水溶)染色 20~60s
⑧自來水沖洗 30~60s
3,、脫水、透明,、封固
①80%乙醇 10~20s
②90%乙醇 10~20s
③95%乙醇作用 2 次,,每次 1~2min。
④無水乙醇作用 2 次,,每次 2~3min,。
⑤二甲苯或浸蠟脫蠟透明液(DZ2011)透明 3 次,每次 2~3min,。
⑥中性樹膠封片,。
(二)冰凍切片染色
1、-乙醇混合固定液 5~10s
2,、自來水沖洗 2~5s
3,、蘇木素染色液滴染 1~5min(可加熱至 50℃)。
4,、自來水沖洗 2~5s
5,、酸性乙醇分化 2~5s
6、自來水沖洗 2~5s
7,、返藍液或溫水返藍 2~5s
8,、自來水沖洗 5~10s
9,、伊紅染色液(水溶)染色 2~20s
10、自來水沖洗 5~10s
11,、80%乙醇 1~2s
12,、95%乙醇 1~2s
13、無水乙醇 2~5s
14,、苯酚二甲苯(1:3) 2~5s
15,、二甲苯或浸蠟脫蠟透明液(DZ2011)透明 3 次,每次 2~5s,。
16,、中性樹膠封片。
染色結(jié)果:
細(xì)胞核呈藍色,;細(xì)胞質(zhì),、肌纖維、膠原纖維,、甲狀腺膠質(zhì)等呈深淺不一的紅色,;角蛋白、紅細(xì)胞等呈明亮的橙紅色,。
注意事項:
1,、切片脫蠟應(yīng)盡量干凈;溫度低時,,可在恒溫箱 60~70℃處理,。
2、系列乙醇應(yīng)經(jīng)常更換新液,。
3,、酸性乙醇分化時間應(yīng)根據(jù)切片厚薄、組織類別以及新舊而定,,另外分化后自來水沖洗時間應(yīng)該足夠,,以便清洗酸。
4,、-乙醇混合固定液是由和95%乙醇等量混合而得,,再加入適量乙酸,密閉保存,。
5,、冷凍切片染色時間盡量要短。
6,、返藍液常使用0.2~1%氨水或 Scott促藍液或0.1~1%碳酸溶液代替,。
7、為了您的安全和健康,,請穿實驗服并戴一次性手套操作,。
有效期:12 個月有效,。常溫運輸和保存,。
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