產(chǎn)品簡介：

血紅蛋白(Hemoglobin,，Hb 或 HGB)是高等生物體內(nèi)負(fù)責(zé)運(yùn)載氧的一種蛋白質(zhì),，是能使血液呈紅色的蛋白，血紅蛋白由四條鏈組成,，兩條α鏈和兩條β鏈,，每一條鏈有一個包含一個鐵原子的環(huán)狀血紅素，Hb 在氧含量高的區(qū)域容易與氧結(jié)合,，在氧含量低的區(qū)域又容易與氧分離,，血紅蛋白的這一特性，使紅細(xì)胞具有運(yùn)輸氧的功能,，血管溶血時血漿游離血紅蛋白(free hemoglobin)濃度增高,。

 游離血紅蛋白檢測試劑盒( 鄰聯(lián)甲苯胺比色法)(Free Hemoglobin Colorimetric Assay Kit)檢測原理是血紅蛋白中亞鐵血紅素有類似過氧化物酶的作用，可在氧化劑的作用下催化鄰聯(lián)甲苯胺(O-tolidine)產(chǎn)生青色或藍(lán)色產(chǎn)物,，吸收峰在 630nm,；在酸性條件下產(chǎn)物呈黃色，吸收峰在 435nm,，產(chǎn)物黃色越深,，說明 FHB 含量越高，反之越低,； 通過分光光度比色法測定 435nm 處吸光度,，就可計(jì)算出血漿游離血紅蛋白含量，主要用于血漿樣本,，亦可用于測定細(xì)胞或組織的裂解液或勻漿液等樣品中游離血紅蛋白含量,。該試劑盒僅用于科研領(lǐng)域,，不適用于臨床診斷或其他用途。

產(chǎn)品組成： 

自備材料：

1,、96 孔板,、酶標(biāo)儀或分光光度計(jì)

2、生理鹽水或蒸餾水

操作步驟(僅供參考)：

1,、準(zhǔn)備樣品：

①血漿,、尿液樣品：血漿、血清按照常規(guī)方法制備后可以直接用于該試劑盒的測定,，尿液通    常也可以直接用于測定,，獲得的樣品-20℃凍存?zhèn)溆谩?/span>

②細(xì)胞或組織樣品：取恰當(dāng)?shù)募?xì)胞或組織裂解液，如果有必要需進(jìn)行適當(dāng)勻漿,，低速離心取

上清,，獲得的樣品-20℃凍存?zhèn)溆谩?/span>

2、配制 Hb 標(biāo)準(zhǔn)品工作液：取 Hb(1mg/ml) 10μl 加入 90μl 生理鹽水,，即為標(biāo)準(zhǔn)品工作液(100μg/ml),。

3、FHB 加樣：取 96 孔板或 EP 管,，按照下表設(shè)置空白孔/管,、標(biāo)準(zhǔn)孔/管、測定孔/管,，溶液應(yīng)按照順序依次加入,，并注意避免產(chǎn)生氣泡；如果樣品中的血紅蛋白含量過低,，可以增加    各管用量(0.02 增加到 0.1 或其他用量,，保證各管體積一致即可）；如果樣品中的血紅蛋白含量過高,，可以減少樣品用量或適當(dāng)稀釋后再進(jìn)行測定,。樣品的檢測最好能設(shè)置平行孔/管， 尤其是標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)作 3 復(fù)孔/管,。

4,、FHB 測定：空白調(diào)零,，以分光光度計(jì)測定 435nm 處標(biāo)準(zhǔn)孔/管和測定孔/管的吸光度， 如果無法檢測 435nm,，亦可檢測 425～450nm 范圍內(nèi)吸光度,。

 計(jì)算結(jié)果：

血漿游離血紅蛋白(mg/L)=測定吸光度/標(biāo)準(zhǔn)吸光度×100(mg/L)，一般＜40mg/ml

 注意事項(xiàng)：

1、 Hb(1mg/ml)為市售的牛血紅蛋白與生理鹽水配制而成的,，未用 HiCN 標(biāo)定其濃度,，可能有一定誤差，有特殊需求的可以自備相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)品,。

2,、 Hb(1mg/ml)和標(biāo)準(zhǔn)品工作液(100μg/ml)均應(yīng) 4℃保存，同時應(yīng)避免污染,。

3,、 也可用酶標(biāo)儀測定,，但應(yīng)根據(jù)酶標(biāo)儀的最大檢測體積進(jìn)行調(diào)整,。

4、 本反應(yīng)比較快,，加入 Acid Assay Buffer 和蒸餾水后應(yīng)立即檢測,，一般 30min 內(nèi)顏色變化不大，但應(yīng)保證不同批次實(shí)驗(yàn)用相同的檢測時間,。

5,、 O-tolidine Solution 和 Acid Assay Buffer 有一定腐蝕性，請小心操作,，避免直接接觸身體,。

6、 氧化劑含有少量的過氧化氫,，使用后應(yīng)及時擰緊瓶蓋,，如果反應(yīng)不變化，可考慮重新配制本氧化劑溶液(0.05%水溶液即可）,。

7,、 為了您的安全和健康，請穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作,。