產(chǎn)品簡介：

MTT 比色法是一種檢測(cè)細(xì)胞存活和生長的方法,。MTT 細(xì)胞增殖及細(xì)胞毒性檢測(cè)試劑盒(MTT Cell Proliferation and Cytotoxicity Assay Kit)被廣泛應(yīng)用于細(xì)胞增殖和細(xì)胞毒性的檢測(cè),。MTT 檢測(cè)原理為活細(xì)胞線粒體中的琥珀酸脫氫酶能使外源性 MTT 還原為水不溶性的藍(lán)紫色 Formazan 并沉積在細(xì)胞中，而死細(xì)胞無此功能,。在特定溶劑存在的情況下,，可以被*溶解。然后通過酶標(biāo)儀可以測(cè)定 570nm 波長附近的吸光度,。細(xì)胞增殖越多越快,， 則吸光度越高；細(xì)胞毒性越大,，則吸光度越低,。

MTT 細(xì)胞增殖及細(xì)胞毒性檢測(cè)試劑盒采用了 自主研發(fā)Formazan solvent，使檢測(cè)本底低,，靈敏度高,，線性范圍寬。

產(chǎn)品組成：

1,、 細(xì)胞培養(yǎng)液

2,、 胰蛋白酶消化液

3、 低速離心機(jī)

4,、 96 孔培養(yǎng)板

5,、 細(xì)胞計(jì)數(shù)板或計(jì)數(shù)器

6、 細(xì)胞培養(yǎng)箱

7,、 搖床

8,、 顯微鏡

9、 酶聯(lián)免疫檢測(cè)儀

操作步驟(僅供參考)：

1,、細(xì)胞用含血清的培養(yǎng)液培養(yǎng)至對(duì)數(shù)生長期,，常規(guī)胰蛋白酶消化液消化細(xì)胞(懸浮細(xì)胞無需消化)。

2,、低速離心,，收集細(xì)胞沉淀。

3,、用培養(yǎng)液重懸細(xì)胞沉淀,，制備成單細(xì)胞懸液，并計(jì)數(shù),。

4,、細(xì)胞接種于 96 孔培養(yǎng)板,，一般接種密度為 3000～10000 個(gè)細(xì)胞/孔,。通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加 3000 個(gè)細(xì)胞，細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入 6000 個(gè)細(xì)胞,。具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目,，需根據(jù)細(xì)胞的大

小,，細(xì)胞增殖速度的快慢等決定。

5,、37℃ 5%CO2 繼續(xù)培養(yǎng)或按照實(shí)驗(yàn)具體需要進(jìn)行培養(yǎng),，一般培養(yǎng) 6～24h。

6,、按照實(shí)驗(yàn)具體要求,，給予 0～20μl 干預(yù)藥物處理，37℃ 5%CO2 繼續(xù)培養(yǎng)至合適時(shí)間,。

7,、棄培養(yǎng)液，每孔加入 10μl MTT solution 和 100μl 新鮮培養(yǎng)液,，在細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)繼續(xù)孵育 4h,。

8、棄培養(yǎng)液,，每孔加入 110μl Formazan solvent,，置搖床上低速振蕩 10 min，使結(jié)晶物充分溶解,。如果紫色結(jié)晶較小或較少,，溶解的時(shí)間會(huì)短一些。如果紫色結(jié)晶較大或較多,， 溶解的時(shí)間會(huì)長一些,。

9、在酶聯(lián)免疫檢測(cè)儀 570nm 測(cè)定各孔吸光度,。

注意事項(xiàng)：

1,、 MTT solution 盡量減少反復(fù)凍融的次數(shù)，當(dāng)顏色變?yōu)榛揖G色時(shí),，請(qǐng)勿使用,。

2、 由于使用 96 孔板進(jìn)行檢測(cè),，如果細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)間較長,，應(yīng)注意蒸發(fā)問題。

3,、 MTT solution 在低溫情況下會(huì)凝固,，置于室溫或 20～25℃水浴至全部融解后使用。

4,、 Formazan solvent 可以-20℃儲(chǔ)存,，當(dāng)產(chǎn)生沉淀或凝固時(shí)可以 37℃水浴孵育以促進(jìn)溶解，并且必須在全部溶解并混勻后使用。

5,、 觀察formazan 是否*溶解,，亦可以借助光學(xué)顯微鏡觀察。

6,、 培養(yǎng)細(xì)胞時(shí)盡量細(xì)菌避免污染,。

7、 應(yīng)注意設(shè)立 OD 調(diào)零孔和對(duì)照,。

8,、 為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作,。

有效期： 12 個(gè)月有效,。