產(chǎn)品簡介

核酸(nucleic acid)是由許多核苷酸聚合成的生物大分子化合物，是生命的基本物質(zhì)之一,，廣泛存在于所有動植物細胞,、微生物體內(nèi)，根據(jù)化學(xué)組成不同,，核酸可分為脫氧核糖核酸(簡稱DNA)和核糖核酸(簡稱RNA),，核酸分子中含有一定比例的磷，DNA中磷含量為9.2%,，RNA中磷含量為9.0%

核酸檢測試劑盒(定磷比色法)檢測原理是在強酸條件下,，核酸分子中的有機磷轉(zhuǎn)化為無機磷，后者與鉬酸銨形成黃色的磷鉬酸銨,，隨后還原劑把高價鉬離子還原成低價鉬離子,，進而形成藍色的鉬藍，在一定濃度范圍藍色深淺與磷含量成正比,，通過分光光度計在660nm 處檢測吸光度,，通過檢查標準曲線，獲得磷含量,，如果待測樣品中有無機磷,，應(yīng)予以扣除，否則結(jié)果偏高,。本試劑盒僅用于科研領(lǐng)域,，不宜用于臨床診斷或其他用途。

產(chǎn)品組成：

自備材料：

1,、蒸餾水、濃硫酸

2,、離心管或試管

3,、容量瓶

4、凱氏燒瓶

5,、水浴鍋

6,、比色杯、分光光度計

操作步驟(僅供參考)：

1,、稀釋標準品：取適量的磷標準(1mg/ml),，按磷標準(1mg/ml)：蒸餾水=1：49 的比例

稀釋標準品至 20μg/ml。取干凈離心管或試管,，按下表進行標準品濃度的依次稀釋,，獲得不同濃度的多個磷標準。

 2,、制備待測樣液：取樣品(如核酸粗提物)0.05g,，加入少量蒸餾水溶解（如果難以溶解，可滴加樣品處理液至溶液 pH=7.0）,，準確定容至 25ml(此溶液樣品含量 2mg/ml),，即為待測樣液。

3,、制備總磷測定液：取上述待測樣液(2mg/ml)1ml，置于 50ml 凱氏燒瓶,，加入 1ml 濃硫酸和 1 粒玻璃珠,，凱氏燒瓶內(nèi)插入一個小漏斗，放在通風(fēng)櫥內(nèi)加熱至溶液呈黃色時取出,，稍冷卻后加入 2～3 滴 H₂O₂,，繼續(xù)消化至透明，表示消化完成,。冷卻,，轉(zhuǎn)移消化液至 100ml 容量瓶中,，用少量蒸餾水洗滌凱氏燒瓶 2 次,，洗滌液一并倒入容量瓶,，加蒸餾水定容至 100ml，混勻后待用,，即為總磷測定液,。

4,、無機磷測定液(選做)：取上述待測樣液(2mg/ml)1ml,，置于 100ml 容量瓶中,，加蒸餾水定容至 100ml,，混勻后待用，即為無機磷測定液,。

5,、磷加樣：按下表進行操作，依次加入下列溶液,，如果樣品中有無機磷,，應(yīng)同時檢測無機    磷，并將無機磷扣除,。

 6,、磷測定：45℃孵育 10min,，冷卻后以分光光度計測定 660nm 處標準管、無機磷測定管,、總磷測定管的吸光度(分別記為A_標準,、A_無機磷,、A_總磷)。

計算： 以磷含量(μg)(0~8 號)為橫坐標,，吸光度為縱坐標作圖，得標準曲線,。以 A_有機磷=A 總磷－A_無機磷之差值，在標準曲線查的有機磷的質(zhì)量(μg),，再根據(jù)測定時取樣 ml 數(shù),，求得有機磷的質(zhì)量濃度(μg/ml)。

按下列公式計算樣品中核酸的質(zhì)量分數(shù)：

核酸質(zhì)量分數(shù)(%)=CV×11/m×100%

式中：C=有機磷的質(zhì)量濃度(μg/ml)

 V=樣品的總體積(ml)

11=1μg 磷相當(dāng)于 11μg 核酸

 m=樣品質(zhì)量(μg)

注意事項：

1,、 待測樣品如不能及時測定,，應(yīng)置于 2~8℃保存，3 天內(nèi)穩(wěn)定,。

2,、 如果樣品濃度過高，應(yīng)用蒸餾水稀釋后重測,，結(jié)果乘以稀釋倍數(shù),。

3、 消化時間應(yīng)視樣品不同而不同,，如果是 RNA 樣品,，一般在 800W 電爐上消化 45min,。

有效期： 6 個月有效。常溫運輸,，4℃保存,。