產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

在組織切片過程中,，一些組織內(nèi)含有骨質(zhì)或鈣化灶時(shí),，含鈣的組織不宜直接用石蠟包埋

切片。這是因?yàn)殁}和石蠟之間的密度不同,，較難切出完整的切片,。對(duì)含鈣組織固定之后，

再進(jìn)行脫鈣或二者同時(shí)進(jìn)行。然后進(jìn)行下游操作如脫水,、透明,、浸蠟、包埋,、切片,。用于脫

鈣的試劑很多，脫鈣劑包括有機(jī)酸,、無機(jī)酸,、乙二胺四乙酸(EDTA)以及電解法脫鈣。EDTA

是一種相對(duì)較好的螯合脫鈣劑,，對(duì)組織結(jié)構(gòu)影響小,，可以較好的保存組織的某些酶類，經(jīng)

EDTA 脫鈣后的組織可以進(jìn)行免疫組化和原位雜交染色,，但是該法脫鈣速度太慢,，一般脫需

要數(shù)周至數(shù)月。

EDTA脫鈣液主要由EDTA,、磷酸鹽等組成,，pH 值為 7.2。其優(yōu)點(diǎn)是：①經(jīng)

EDTA 脫鈣的組織染色結(jié)果好,；②對(duì)組織的結(jié)構(gòu)損害小,。其缺點(diǎn)是：①脫鈣速度很慢，不適

合常規(guī)標(biāo)本脫鈣使用,；②脫鈣后組織會(huì)稍微變硬,；③不宜用化學(xué)方法確定脫鈣終點(diǎn)。

自備材料：

1,、 PBS

2,、 蒸餾水

3、 加熱裝置或微波爐

EDTA 脫鈣液操作步驟(僅供參考)：

1,、骨組織脫鈣時(shí),，取材不易過厚，一般大約 5mm,。

2,、組織固定后，用 PBS 清洗 3 次,，每次 20min,。

3、組織用蒸餾水洗清洗 3 次,，每次 20min,。

4,、 組織轉(zhuǎn)移至 20~30 倍體積的 EDTA 脫鈣液中，脫鈣 10～30 天或更長時(shí)間,。如果想加

快脫鈣速度,，可以置于 37℃進(jìn)行脫鈣。如果必要,，更換新的 EDTA 脫鈣液繼續(xù)脫鈣,，

多數(shù)組織脫鈣 2 周～3 個(gè)月即可，每周更換一次直至終點(diǎn),。亦可采用微波快速脫鈣法：

微波爐設(shè)在 200W 左右的檔位,，每次加熱 5min，依據(jù)組織厚度和密度重復(fù) 3～5min,，

中間間隔 3～5min,。

5、用蒸餾水沖洗數(shù)次,。

6,、常規(guī)脫水、包埋,。

 注意事項(xiàng)：

1,、 厚度 5mm 的骨組織塊脫鈣時(shí)間一般脫鈣 10~30 天即可，大多數(shù)在 14～60 天即可,。

2,、 適當(dāng)加溫能加快脫鈣的速度，一般不應(yīng)超過 37～40℃,，溫度過高容易使骨組織造成松

散解體，尤其不可大于 60℃,。

3,、 脫鈣應(yīng)*，防止脫鈣不足或過度,。脫鈣程度應(yīng)控制在不影響組織切片的同時(shí)盡量縮短

脫鈣時(shí)間,，以免脫鈣過長引起組織損害。

4,、 脫鈣用具避免使用金屬容器,，盡量使用玻璃容器。

5,、 骨組織脫鈣應(yīng)先固定后脫鈣或脫鈣固定同時(shí)進(jìn)行,，不應(yīng)先脫鈣后固定，以便減少組織的

損傷程度,。

6,、 每隔一段時(shí)間檢測(cè)一次脫鈣程度,，脫鈣過度會(huì)增加組織的損傷程度，影響染色結(jié)果,。

7,、 為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作,。

有效期： 12 個(gè)月有效,。

附錄：

脫鈣終點(diǎn)的測(cè)定(物理法)：采用針刺、手掐,、鉗夾等方法,，當(dāng)骨組織變軟或針刺時(shí)沒有阻力

感即可終止脫鈣。物理檢測(cè)法會(huì)對(duì)組織結(jié)構(gòu)有一定的損害,， 盡量避免用力過大或反復(fù)檢測(cè),。