在尿液樣本中加入蛋白沉淀劑和麗春紅S，離心,，蛋白質(zhì)-染料復(fù)合物被沉淀下來,，將沉淀物加入堿性溶液溶解后，分光光度法檢測560nm處吸光度,，計(jì)算蛋白含量,。Leagene 尿蛋白檢測試劑盒(麗春紅比色法)主要用于定量檢測尿液中蛋白含量，較雙縮脲法靈敏,，對白蛋白的敏感性比球蛋白要高,。

產(chǎn)品組成：

規(guī)格名稱	100T	儲存
試劑(A): 磺基水楊酸溶液	100ml	RT 避光
試劑(B): 麗春紅S試劑(10×)	10ml	RT 避光
試劑(C): Alkaline Buffer	200ml	RT
試劑(D): 蛋白標(biāo)準(zhǔn)(BSA)	20mg	RT
試劑(E): 蛋白標(biāo)準(zhǔn)配制液	1.5ml	RT
使用說明書	1份

自備材料：

蒸餾水
離心管、試管
比色杯,、分光光度計(jì)

操作步驟(僅供參考)：

取適量麗春紅S試劑(10×),，按1:9加入蒸餾水，稀釋至1×,，室溫可保存2～3個(gè)月,。
取1ml蛋白標(biāo)準(zhǔn)配制液加入到蛋白標(biāo)準(zhǔn)(BSA)中，充分溶解后配制成20mg/ml的蛋白標(biāo)準(zhǔn)溶液,，配制后可立即使用,，溶解后的蛋白標(biāo)準(zhǔn)溶液應(yīng)-20℃保存。
取適量20mg/ml蛋白標(biāo)準(zhǔn),，稀釋至濃度分別為0,、200、400,、600,、800、1000,、1200,、1600μg/ml或所需濃度。特別提示：待測蛋白溶解于什么樣的稀釋液中,，蛋白標(biāo)準(zhǔn)也宜溶解于什么樣的稀釋液中,；例如待測蛋白溶解于蔗糖中，亦取20mg/ml蛋白標(biāo)準(zhǔn)溶解于蔗糖中,，一般也可以用0.9%NaCl或PBS作為溶解BSA稀釋液,。稀釋后的蛋白標(biāo)準(zhǔn)也應(yīng)-20℃長期保存,。
制作蛋白標(biāo)準(zhǔn)曲線：各取100μl上述稀釋度的蛋白標(biāo)準(zhǔn)，與測定樣本操作相同（見第6步） ,。”0”號管空白調(diào)零,，比色杯光徑1cm，560nm比色,，制成標(biāo)準(zhǔn)曲線,。

5.半定量實(shí)驗(yàn)：取3～5ml新鮮尿液轉(zhuǎn)移入小試管，滴加磺基水楊酸溶液3～4滴,，形成界面,，立即觀察，如有渾濁,，提示尿液中含有蛋白質(zhì),，渾濁深淺表示含量多少,。?

陰性(-)	不顯渾濁
可疑(±)	輕微渾濁,，隱約可見，含蛋白量約為0.05～0.2g/L
(+)	明顯渾濁,，無顆粒出現(xiàn),，含蛋白量約為0.3g/L
(2+)	稀薄乳樣渾濁，出現(xiàn)顆粒,，,，含蛋白量約為1g/L
(3+)	乳濁，有絮片狀沉淀,，含蛋白量約為3g/L
(4+)	絮片狀沉淀,，含蛋白量＞5g/L

6.取離心管，根據(jù)上述半定量實(shí)驗(yàn)測得的蛋白濃度按下表要求加入待測樣本和蒸餾水,，再加入1ml 1×麗春紅S試劑,，混勻。3500g離心10min,，將上清緩緩倒出后,，倒置于濾紙上數(shù)分鐘，用濾紙條吸附管壁上多余的試劑(勿觸及管低沉淀),。再加入2ml Alkaline Buffer至沉淀中,，充分混合使沉淀溶解。

蛋白濃度	待測樣本	蒸餾水
＜1g/L	100μl	—
1～3g/L	50μl(測得值×2)	50μl
>3g/L	10μl(測得值×10)	90μl

7,、分光光度計(jì)測定560nm波長處的吸光度,，如無560nm，540～595nm之間的波長也可,，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算出樣品的蛋白濃度,。

參考區(qū)間： 46.5±18.1 mg/L

注意事項(xiàng)：

1.蛋白標(biāo)準(zhǔn)(BSA)粉末溶解于蛋白標(biāo)準(zhǔn)配制液后,，即獲得蛋白標(biāo)準(zhǔn)原液，該原液中含有防腐劑,，不影響后續(xù)檢測,，該蛋白標(biāo)準(zhǔn)原液-20℃長期保存。

2.待測蛋白溶解于什么樣的稀釋液中,，蛋白標(biāo)準(zhǔn)也宜溶解于什么樣的稀釋液中,，否者待測蛋白與蛋白標(biāo)準(zhǔn)中所含非蛋白成分不一致，有可能導(dǎo)致測定不準(zhǔn)確,。

3.待測樣本蛋白含量＜0.1g/L時(shí),，可用1ml樣本加0.1ml麗春紅S試劑(10×)，混勻,，余下操作同上,。

4.本試劑盒也可以用酶標(biāo)儀檢測，可檢測1000T以上,。

5.本法較為靈敏,，較比濁法誤差小，膽紅素＜4mg/L時(shí)對結(jié)果無影響,，也不受室溫影響,。為了加快BCA法測定蛋白濃度的速度可以適當(dāng)用微波爐加熱，但是切勿過熱,。室溫保存,。蛋白標(biāo)準(zhǔn)配制成溶液后-20℃凍存。

6.離心沉淀后上清液必須全部去除,，但不損失沉淀物,，否則可影響比色結(jié)果。為了加快BCA法測定蛋白濃度的速度可以適當(dāng)用微波爐加熱,，但是切勿過熱,。室溫保存。蛋白標(biāo)準(zhǔn)配制成溶液后-20℃凍存,。

7.為了您的安全和健康,，請穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

有效期： 12個(gè)月有效,。蛋白標(biāo)準(zhǔn)配制成溶液后應(yīng)-20℃凍存,。

尿蛋白檢測試劑盒（麗春紅比色法）說明書

會員登錄

收藏該商鋪

提示