產(chǎn)品簡介：

Acridine Orange,AO 屬于三環(huán)雜芳香燃料,，可以標記DNA,、RNA，屬于異染性熒光染料,。該染料具有膜通透性,，能透過細胞膜,，使核DNA 和RNA 染色,。因此AO 常用于細胞內(nèi)DNA 和RNA 進行檢測。AO 與核酸結(jié)合方式主要有：1,、插入性結(jié)合,，AO 嵌入核酸雙鏈的堿基對之間，這種結(jié)合方式主要為AO 與DNA 的結(jié)合,，其熒光發(fā)射峰為530nm,， 激發(fā)后呈綠色熒光；2,、靜電吸引,，帶正電荷的AO 與單鏈核酸的磷酸根(帶負電荷)產(chǎn)生靜電間的吸引結(jié)合，這種結(jié)合方式主要為AO 與RNA 的結(jié)合,，其熒光發(fā)射峰為640nm,，激發(fā)后呈紅色熒光，少量結(jié)合會呈桔黃色或桔紅色熒光,。因此,，吖啶橙嵌合到雙鏈DNA 分子中顯綠色，與DNA 單鏈或RNA 結(jié)合時發(fā)桔黃色或橙紅色熒光,。

AO 染色試劑盒(Acridine Orange DetectionKit)主要由AO Stain,、AO Stain Buffer 組成，常用于細胞凋亡的檢測,。染色后在熒光顯微鏡下觀察,，吖啶橙可透過正常細胞膜，使細胞核呈綠色或黃綠色均勻熒光,；而在凋亡細胞中,，因染色質(zhì)固縮或斷裂為大小不等的片斷，形成凋亡小體,。AO 使其染上致密濃染的黃綠色熒光或黃綠色碎片顆粒,；而壞死細胞黃熒光減弱甚至消失。AO 染色常與EB 染色合用雙染,，EB 只染死細胞使之產(chǎn)生桔黃色熒光,，由此可區(qū)分出正常細胞、凋亡細胞及壞死細胞,。

產(chǎn)品組成：

 自備材料：

1,、 熒光顯微鏡

2,、 低速離心機

3、 PBS

4,、 細胞計數(shù)板

5,、 載玻片、蓋玻片

操作步驟(僅供參考)：

(一) AO 單獨染色

1,、收集細胞(采用流式細胞儀檢測時,，應先固定細胞)，用 AO Stain Buffer(1×)清洗細胞 1 次,，加入適量的 AO Stain Buffer(1×)重懸細胞,，計數(shù)并調(diào)節(jié)細胞濃度至 10⁶/ml。

2,、取適量的細胞懸液和 AO Stain,，按照細胞懸液:AO Stain=19:1 的比例混合，輕輕混勻,。如果采用熒光顯微鏡下觀察,，一般取 95μl 細胞懸液和 5μlAO Stain 混合即可。

  3,、室溫避光染色 15min,，滴加于載玻片上并加蓋玻片或上流式細胞儀分析。

  4,、熒光顯微鏡下觀察(激發(fā)濾光片波長 488nm,，阻斷濾光片波長 515nm)，計數(shù)并拍照,。

 染色結(jié)果：

 (二) AO/EB 雙染色

(二) AO/EB 雙染色

1,、收集細胞，用 AO Stain Buffer(1×)清洗細胞 1 次,，加入適量的 AO Stain Buffer(1×) 重懸細胞,，計數(shù)并調(diào)節(jié)細胞濃度至 10⁶/ml。

2,、取適量的細胞懸液和 AO Stain,，按照細胞懸液:AO Stain=19:1 的比例混合，并加入適量 EB 染色液,，輕輕混勻,。如果采用熒光顯微鏡下觀察，一般取 95μl 細胞懸液和 5μl AO Stain 混合即可。

3,、室溫避光染色 15min,，滴加于載玻片上并加蓋玻片

4、熒光顯微鏡濾光片 515nm 觀察,，計數(shù)并拍照,。

染色結(jié)果

注意事項：

1,、AO 染色常與 EB 染色合用，可區(qū)分出正常細胞,、凋亡細胞及壞死細胞。

2,、如有低溫離心機進行離心效果更佳,，同時應注意減少試劑暴露于強光下的時間。

3,、為了您的安全和健康,，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

有效期： 6 個月有效,。