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反相色譜法用的乙腈與甲醇的區(qū)別
1,、首先,,乙腈價(jià)格高
乙腈,特別是HPLC級(jí)的價(jià)格很高,,但是,,文獻(xiàn)或LC廠家所示的條件,多用乙腈,,這是為什么呢,?現(xiàn)就此談?wù)劇?/p>
2、吸光度
乙腈HPLC級(jí)的小,。乙腈和甲醇的市銷(xiāo)HPLC級(jí)和優(yōu)級(jí)的吸收光譜中,,乙腈HPLC吸收zui小(特別是在短波長(zhǎng)上?。?。所謂HPLC級(jí)是除去具有吸收UV的雜質(zhì),在規(guī)定的波長(zhǎng)上吸光度限制在規(guī)格值以內(nèi),。在UV檢測(cè)時(shí),,產(chǎn)生的噪聲小,,因此在進(jìn)行UV短波長(zhǎng)上的高靈敏度分析時(shí)乙腈HPLC級(jí)zui適宜。另外,,在UV檢測(cè)中的梯度基線上也是乙腈HPLC級(jí)產(chǎn)生鬼峰少,,雖然,其他與水相溶性高的有機(jī)溶劑有各種各樣,,但很難能找到比乙腈HPLC級(jí)吸收更小的,。另外,甲醇的HPLC級(jí)和優(yōu)級(jí),,雖然所得的光譜相差不大,,但是優(yōu)級(jí)不能保證吸光度,有可能產(chǎn)生偏差,,價(jià)格也相差不大,,所以盡量使用HPLC級(jí)。
3,、壓力
乙腈低,,柱內(nèi)承受的壓力,根據(jù)有機(jī)溶劑的種類(lèi)或混合比率的不同而異,,水/乙腈,,水/甲醇混合液的比率與輸液壓力的關(guān)系中,甲醇與水混合,,壓力增高,,而乙腈同樣與水混合且并不如此。所以,,乙腈一方,,在同樣的流速下不在柱內(nèi)加上多余的壓力。從上述兩項(xiàng),,可以確認(rèn)使用乙腈的意義,,那么,甲醇除了價(jià)格以外,,還有沒(méi)有其化優(yōu)點(diǎn)呢,?
4、洗脫能力
一般而言,,乙腈較強(qiáng)。乙腈和甲醇分別用同樣的比率與水混合時(shí),,一般情況下,,乙腈的洗脫能力強(qiáng)。特別是混合比率低時(shí),,從咖啡因和苯酚的洗脫來(lái)看,,獲得同樣的保留時(shí)間,,乙腈的比率,只需甲醇的比率的一半以下即可,。另一方面,,有機(jī)溶劑100%或與此極接近時(shí),從胡蘿卜素和膽甾醇來(lái)看,,常常都是甲醇的洗脫能力強(qiáng),。混合比在50比1等較為特殊時(shí),,調(diào)制的誤差大,,影響保留時(shí)間,或平衡化的時(shí)間長(zhǎng),,乙腈遇到這種情況時(shí),,用甲醇的10比1混合代替乙腈,這樣操作方便些,。溶劑受溫度影響時(shí),,不采用容器定量,而采用重量的方法(考慮比重),,可使混合比的誤差減小,。
5、分離(洗脫)的選擇性
兩者的差異,,乙腈和甲醇在分離的選擇性上不同,。由于有機(jī)溶劑分子的化學(xué)性質(zhì)(甲醇和乙醇是質(zhì)子性,乙腈和四氫呋喃是非質(zhì)子性)不同所致,。因此,,在用乙腈類(lèi)不能獲得分離的選擇性,就試用甲醇類(lèi)看看,。
6,、峰形
用時(shí)出現(xiàn)差異。像水楊酸化合物(在鄰位上具有羧基或甲氧基的苯酚化合物)等,,用乙腈類(lèi)時(shí)拖尾大,,用甲醇類(lèi)可抑制??墒?,一般情況下,聚合物類(lèi)反相柱,,與硅膠柱相比,,更具有峰形寬的傾向,特別是用聚苯乙烯分析柱芳香族化合物等時(shí)常見(jiàn),。這在流動(dòng)相是甲醇時(shí)非常顯著,,而用乙腈時(shí)不明顯,。為此,用聚合物類(lèi)反相用柱時(shí)建議采用后者(乙腈類(lèi)),,這是因?yàn)橐译媸鼓z膨潤(rùn),。
7、流動(dòng)相的脫氣,,乙腈類(lèi)要注意
混合溶劑的置制,,不說(shuō)在LC裝置內(nèi),只談?lì)A(yù)先在流動(dòng)相瓶?jī)?nèi)進(jìn)行時(shí),,(等濃度系統(tǒng)),。甲醇與水混合時(shí)發(fā)熱,多余的溶解空氣較易變?yōu)槊摮鰵馀荩摎馊菀祝?。而乙腈由于吸熱冷卻,,隨著慢慢回到室溫,產(chǎn)生氣泡,,所以要考慮脫氣(加溫?cái)嚢?,過(guò)濾膜,He脫氣等),。
8,、結(jié)論
以上反相色譜法流動(dòng)相常用的乙腈和甲醇進(jìn)行了比較。粗略地講是,,使用乙腈HPLC級(jí),,在選擇性,峰形差時(shí)試用甲醇HPLC,,但根據(jù)各種不用性質(zhì)設(shè)計(jì)分析條件也是必要的,。