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免疫磁珠集菌方法

閱讀:1659      發(fā)布時間:2017-7-13
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免疫磁珠集菌方法(IMS):
原理:用包被有O157:H7單克隆抗體的磁珠進(jìn)行免疫磁性的分離方法。對待檢標(biāo)本先進(jìn)行增菌,,然后再和抗O157:H7的磁珠共同孵育,,zui后將磁珠-細(xì)菌混合物懸浮后涂于CT-SMAC平板或科瑪嘉O157:H7顯色平板進(jìn)行分離培養(yǎng)。

操作步驟:
1,、 取下磁板,,將編號的1.5ml的Eppendorf離心管,置入Dynal     MPC-M架上,。

2,、 輕柔混勻抗 E.coilO157免疫磁珠 (反復(fù)顛倒,直到管底沉淀*消失),,吸取抗E.coilO157免疫磁珠,,置入每只編號的Eppendorf離心管20ul。

3,、 取金標(biāo)檢測陽性的樣品增菌培養(yǎng)物1ml,,加入上述對應(yīng)的Eppendorf離心管中。蓋緊蓋子,。輕輕顛倒混勻,。

4、置于Dynal  MX3旋轉(zhuǎn)培養(yǎng)器上,,室溫下,,旋轉(zhuǎn)30分鐘(如果沒有旋轉(zhuǎn)器,可人工旋轉(zhuǎn)),。

5,、將磁鐵板插入Dynal  MPC-M架中,反復(fù)顛倒數(shù)次,,將抗E.coilO157免疫磁珠吸附沉淀在Eppendorf離心管上,。吸去上清(包括殘留在管蓋上的液體),并棄掉,。

6、將磁鐵板從Dynal  MPC-M架抽出,。每只Eppendorf離心管中加入1mlPBS-Tween20(pH7.4),輕輕顛倒混勻,,重新懸浮免疫磁珠,。

7、重復(fù)5-6步驟,。

8,、重復(fù)5步驟。

9,、用80-100 ul PBS-Tween20(pH7.4) 重新懸浮免疫磁珠細(xì)菌混合物,。
PBS-Tween20(pH7.4)配方:
KH2PO4              0.2g
NaH2PO4 · 12H2O      2.9g
NaCL                 8.0g
KCL                  0.2g
Tween-20              0.5ml
加水至1000ml

 

 

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