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大牛是這樣做成骨細(xì)胞誘導(dǎo)實(shí)驗(yàn)的!

閱讀:2289      發(fā)布時(shí)間:2021-6-7
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       一,、實(shí)材料及試劑

       培養(yǎng)板,、酒精燈、移液槍,、CO2培養(yǎng)箱,、顯微鏡等MC3T3-E1(前成骨細(xì)

 

       二、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容

       試驗(yàn)方法:將MC3T3-E1(前成骨細(xì)胞)細(xì)胞接種于含MEM-α培養(yǎng)基(10%胎牛血清,,1%青鏈霉素)的培養(yǎng)瓶?jī)?nèi),,放置于二氧化碳培養(yǎng)箱(37℃,5%CO2,,潮濕)培養(yǎng),,每三天更換一次培養(yǎng)液,待細(xì)胞鋪滿瓶底的80%以上時(shí),,用胰蛋白酶消化,,加入MEM-α培養(yǎng)基(10%胎牛血清,1%青鏈霉素),,將細(xì)胞吹打下來(lái)并吸取到10 mL離心管中,,離心,棄上清,,注意不要碰到管口,,加入MEM-α培養(yǎng)基(10%胎牛血清,1%青鏈霉素)重懸,,將細(xì)胞按照每孔1.2×105個(gè)細(xì)胞數(shù)接種于六孔板中,,實(shí)驗(yàn)組加含誘導(dǎo)劑(50ug/mL抗壞血酸和10mmol/Lβ-甘油磷酸鈉)的培養(yǎng)液,對(duì)照組用常規(guī)培養(yǎng)液進(jìn)行培養(yǎng),,每三天更換一次培養(yǎng)液,。

 

       三、注意事項(xiàng)

       1,、實(shí)驗(yàn)操作過(guò)程中要避免污染,。
       2、消化時(shí)間不宜過(guò)長(zhǎng),。
       3,、誘導(dǎo)后細(xì)胞易脫壁,換液操作要盡可能輕,。

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