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花生四烯酸檢測(cè)的操作步驟

閱讀:4085      發(fā)布時(shí)間:2019-3-18
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接下來喆圖小編就來給大家說說檢測(cè)需要提供的試劑和器材:

1,、37℃恒溫培養(yǎng)箱

2,、 酶標(biāo)儀

3、 移液器及一次性吸頭

4,、 蒸餾水

5,、 一次性試管

6、 吸水紙

1,、準(zhǔn)備:從冰箱取出試劑盒,,室溫復(fù)溫平衡30分鐘。

2,、配液:用蒸餾水將20倍濃縮洗滌液稀釋成原倍的洗滌液,。

3、加標(biāo)準(zhǔn)品和待測(cè)樣本:取足夠數(shù)量的酶標(biāo)包被板,,固定于框架上,,分別設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔、待測(cè)樣本孔和空白對(duì)照孔,,記錄各孔位置,,在標(biāo)準(zhǔn)品孔中加入標(biāo)準(zhǔn)品50μL;待測(cè)樣本孔中先加入待測(cè)樣本10μL,,再加樣本稀釋液40μL,,空白對(duì)照孔不加。

4,、在37℃水浴鍋中溫育30min,。

5、洗板:棄去液體,吸水紙上拍干,,每孔加滿洗滌液,,靜置1min,甩去洗滌液,,吸水紙上拍干,,如此重復(fù)洗板4次。

6,、加酶標(biāo)工作液:每孔加入酶標(biāo)工作液50μL,,空白對(duì)照孔不加。

7,、溫育:在37℃水浴鍋中溫育30min,。

8、洗板:棄去液體,,吸水紙上拍干,,每孔加滿洗滌液,靜置1min,,甩去洗滌液,,吸水紙上拍干,如此重復(fù)洗板4次,。

9,、顯色:每孔先加入顯色劑A 液50μL,再加入顯色劑B液 50μL,,37℃避光顯色15min,。

10、終止:取出酶標(biāo)板,,每孔加終止液50μL,,終止反應(yīng)(顏色由藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色)。

11,、測(cè)定:以空白孔調(diào)零,,在終止后15分鐘內(nèi),,用450nm波長測(cè)量各孔的吸光值(OD值),。

12、計(jì)算:根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品的濃度及對(duì)應(yīng)的OD值,,計(jì)算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線回歸方程,,再根據(jù)樣本的OD值,在回歸方程上計(jì)算出對(duì)應(yīng)的樣品濃度,,也可以使用各種應(yīng)用軟件來計(jì)算,。MAX終濃度為實(shí)際測(cè)定濃度乘以稀釋倍數(shù)。

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