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     喆圖小編今天來講講細(xì)胞傳代的操作步驟：需要準(zhǔn)備的器材：酒精噴壺,、PBS緩沖液,、胰酶、培養(yǎng)基,、巴氏吸管,、水浴鍋、移液器,、離心管,、超凈臺(tái)、CO2培養(yǎng)箱,、離心機(jī)等,。

     然后我們要把我們準(zhǔn)備的器材放入超凈臺(tái)，打開紫外殺菌燈滅菌,，需要注意的是若培養(yǎng)的細(xì)胞對(duì)溫度比較敏感,，將培養(yǎng)基瓶子放入37℃的水浴鍋中，使得培養(yǎng)基溫度在37℃,，再轉(zhuǎn)移到超凈臺(tái)紫外滅菌,，當(dāng)然一般的細(xì)胞對(duì)培養(yǎng)基的溫度不是很敏感，不用對(duì)培養(yǎng)基加溫也是可以的,。細(xì)胞培養(yǎng)間也需要紫外照射半小時(shí)左右,。

  接下來小編就開始來操作了，全程嚴(yán)格無菌操作,！

  1,、紫外照射滅菌后，穿好滅菌服,，戴好滅菌手套和口罩,。

  2、從CO2培養(yǎng)箱中取出細(xì)胞培養(yǎng)瓶,，用酒精噴壺在培養(yǎng)瓶表面噴灑75%酒精消毒,，轉(zhuǎn)移培養(yǎng)瓶到超凈臺(tái)。

  3,、打開蓋子,，輕輕吸出舊的培養(yǎng)液，用巴氏吸管加入適量PBS緩沖液洗滌1-2次,，棄去PBS緩沖液,。

  4、可用移液器加入2-3ml胰酶,，“十字”晃動(dòng),，使胰酶充分接觸細(xì)胞。

  5、將加入胰酶的細(xì)胞培養(yǎng)瓶轉(zhuǎn)移到倒置顯微鏡載物臺(tái),，鏡下觀察細(xì)胞消化情況,，當(dāng)細(xì)胞變圓且大量脫落時(shí)，準(zhǔn)備終止消化,，用75%的酒精噴灑培養(yǎng)瓶表面,，轉(zhuǎn)移到超凈臺(tái)

  6、用移液器加入等量含血清培養(yǎng)基,，終止消化,。移液器充分吹打，使細(xì)胞能夠*脫落,。

  7,、將培養(yǎng)瓶中混合液體轉(zhuǎn)移至離心管中，配平,，離心5分鐘左右,。

  8、離心好后,，用酒精噴壺噴灑離心管表面,，轉(zhuǎn)移進(jìn)超凈臺(tái)，打開蓋子,，將上清液倒入廢液缸,。

  9、加入適量體積含血清培養(yǎng)基,，用移液器或巴氏吸管輕輕吹打,，制成細(xì)胞懸液。

  10,、將細(xì)胞懸液分裝進(jìn)3個(gè)潔凈滅菌培養(yǎng)瓶,，加入適量培養(yǎng)基，蓋好蓋子

  11,、將分裝好的培養(yǎng)瓶置于倒置顯微鏡載物臺(tái),，觀察細(xì)胞情況，細(xì)胞應(yīng)保證一定數(shù)量,，數(shù)量太少會(huì)影響生長(zhǎng)情況。

  12,、在培養(yǎng)瓶上做記號(hào),，注明傳代時(shí)間，細(xì)胞種類,，操作人員等信息,。在放入CO2培養(yǎng)箱之前應(yīng)再次用酒精噴一噴培養(yǎng)瓶表面，然后整理操作臺(tái),，用75%酒精擦拭超凈臺(tái)臺(tái)面,，清理廢液和垃圾,。

  以上內(nèi)容僅供參考，如需了解請(qǐng)聯(lián)系喆圖客服,！