基本原理
將Transwell小室放入培養(yǎng)板中，小室內(nèi)稱上室,，培養(yǎng)板內(nèi)稱下室,，上室內(nèi)盛裝上層培養(yǎng)液，下室內(nèi)盛裝下層培養(yǎng)液,，上下層培養(yǎng)液以聚碳酸酯膜相隔,。我們將細(xì)胞種在上室內(nèi)，由于聚碳酸酯膜有通透性,，下層培養(yǎng)液中的成分可以影響到上室內(nèi)的細(xì)胞,，從而可以研究下層培養(yǎng)液中的成分對細(xì)胞生長、運動等的影響,。
應(yīng)用不同孔徑和經(jīng)過不同處理的聚碳酸酯膜,，就可以進(jìn)行共培養(yǎng)、細(xì)胞趨化,、細(xì)胞遷移,、細(xì)胞侵襲等多種方面的研究。侵襲實驗中使用到的Matrigel 是從小鼠EHS肉瘤中提取的基質(zhì)成分,，含有LN,、IV型膠原,、接觸蛋白和肝素硫酸多糖，鋪在無聚乙烯吡硌烷酮的聚碳酸酯濾膜上,，能在DMEM培養(yǎng)基中重建形成膜結(jié)構(gòu),，這種膜結(jié)構(gòu)與天然基質(zhì)膜結(jié)構(gòu)極為相似。
Transwell小室的濾膜孔徑一般為8μm,，在侵襲實驗中,，膜孔都被Matrigel覆蓋，細(xì)胞不能自由穿過,，必須分泌水解酶，并通過變形運動才能穿過這種鋪有Martrigel 的濾膜,，這與體內(nèi)情況較為相似,。細(xì)胞欲進(jìn)入下室，先要分泌基質(zhì)金屬蛋白酶（MMPs）將基質(zhì)膠降解,，方可通過聚碳酸酯膜,。計數(shù)進(jìn)入下室的細(xì)胞量可反映腫瘤細(xì)胞的侵襲能力。
所需材料
ØTranswell小室
Ø細(xì)胞生長培養(yǎng)基
Ø胎牛血清
Ø胰蛋白酶
ØPBS
Ø青霉素-鏈霉素溶液（100×）
Ø結(jié)晶紫或臺盼藍(lán)
Ø甲醇
ØMatrigel（侵襲實驗）
主要試劑配置
（1）PBS磷酸鹽緩沖液： PBS粉劑每袋加ddH2O定容至1000ml,，調(diào)pH7.2,，121℃，30min,，高壓滅菌,，4℃保存。
（2）細(xì)胞生長培養(yǎng)基：低溫培養(yǎng)箱-20℃保存,，臨用前按體積比配成含10% FBS和1%青霉素-鏈霉素雙抗的*培養(yǎng)液,。
操作步驟
1．所有細(xì)胞培養(yǎng)試劑和細(xì)胞培養(yǎng)池放在電熱恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)37℃溫育；
2．待測細(xì)胞培養(yǎng)至對數(shù)生長期,，消化細(xì)胞,，用PBS和無血清培養(yǎng)基先后洗滌1次，用無血清培養(yǎng)基懸浮細(xì)胞,，計數(shù),，調(diào)整濃度為2×105 /ml；
3．如進(jìn)行侵襲實驗,，將Matrigel膠從-20℃取出于4℃冰箱過夜,，在4℃條件下將Matrigel膠用無血清的細(xì)胞培養(yǎng)基稀釋至300 μl/ml，取100 μl均勻涂抹一層于細(xì)胞培養(yǎng)池的PET膜上表面,，然后將培養(yǎng)池輕輕放入24孔板孔內(nèi),，37℃放置3 h左右，取出于超凈工作臺過夜干燥,。
注：如進(jìn)行遷移實驗,，則跳過這一步驟
4．在下室（即24孔板底部）加入600－800 μl 含10％血清的培養(yǎng)基,，上室加入100－150 μl細(xì)胞懸液，繼續(xù)在孵箱培養(yǎng)24 h,；
5．將其下表面浸泡在70%甲醇溶液中,，固定30 min~60 min，用結(jié)晶紫或臺盼藍(lán)染色,，鏡檢,，并計算PET膜下表面的細(xì)胞數(shù)，計算中間和四周5個視野,，取平均值,。
實驗結(jié)果
鏡下對染色后的細(xì)胞進(jìn)行計數(shù)，計數(shù)值高,，則該組細(xì)胞遷移/侵襲能力強,。
以上設(shè)備詳情，請咨詢上海喆圖,。
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