培養(yǎng)前的工作準(zhǔn)備充分
包括耗材的處理,、試劑的配置，無(wú)菌檢驗(yàn)等等,。
玻璃器皿的清洗,。對(duì)于玻璃器皿(細(xì)胞瓶、裝營(yíng)養(yǎng)液的瓶子,、小青霉素瓶等)要先用洗衣粉刷干凈(注意死角),，然后沖干凈。用酸液浸泡 24 h 以上,，之后用清水沖洗 10 遍,，除去殘留酸液。瓶子之類,，沖洗過(guò)程要使勁搖晃,。然后在雙蒸水浸泡 24 h,。晾干后包扎，使用鼓風(fēng)干燥箱160℃ 干烤 2 h 待用,。
試劑配置,。細(xì)胞培養(yǎng)用的液體一般使用雙蒸以上的水即可。并注意 pH 值的調(diào)節(jié),。
無(wú)菌檢驗(yàn),。主要采用過(guò)濾除菌：如胰酶、抗生素,、G-418 溶液,、各類培養(yǎng)基、丙酮酸鈉,、谷氨酰胺等,。有些可以采用高壓滅菌：如 PBS、D-Hank's等,。
試劑分裝保存
包括營(yíng)養(yǎng)液,、胰酶、血清等,。
血清特別重要,。血清必須貯存于 –20℃低溫培養(yǎng)箱，如果一次無(wú)法用完一瓶,，可將 40～50ml 分裝于無(wú)菌酸處理瓶中,，甚至置青霉素瓶保存。一般廠商提供的血清為無(wú)菌,，不需再無(wú)菌過(guò)濾,。若發(fā)現(xiàn)血清有許多懸浮物，則可將血清加入培養(yǎng)基內(nèi)一起過(guò)濾,，勿直接過(guò)濾血清,。(一般情況下不影響細(xì)胞培養(yǎng))
瓶裝血清一定要逐步解凍: 4℃ 冰箱全溶后再分裝，在溶解過(guò)程中須規(guī)則搖晃均勻(小心勿造成氣泡),，使溫度與成分均一,，減少沉淀的發(fā)生。勿直接由 –20℃ 直接至 37℃ 解凍,，因溫度改變太大,，容易造成蛋白質(zhì)凝結(jié)而發(fā)生沉淀。
熱滅活是指 56℃,，30 分鐘加熱已*解凍之血清,。水浴鍋升到 56℃后，將血清放入,，待溫度升高到 56℃ 后計(jì)時(shí),，一般 5 分鐘左右規(guī)則搖晃均勻一次,。此熱處理之目的是使血清中之補(bǔ)體成份去活化。除非必須,，一般不要作此熱處理,，因?yàn)闀?huì)造成沉淀物之顯著增多，且會(huì)影響血清之品質(zhì),。注意更換新血清(包括不同批次)對(duì)細(xì)胞的影響,。
無(wú)菌意識(shí)要強(qiáng)
實(shí)驗(yàn)進(jìn)行前，超凈臺(tái)以紫外燈照射 30 分鐘滅菌,，以 70 % ethanol 擦拭無(wú)菌操作抬面,，并開(kāi)啟超凈工作臺(tái)風(fēng)扇運(yùn)轉(zhuǎn)數(shù)分鐘后，才開(kāi)始實(shí)驗(yàn)操作,。
每次操作只處理一株細(xì)胞株,，以避免失誤混淆或細(xì)胞間污染。實(shí)驗(yàn)完畢后,，將實(shí)驗(yàn)物品帶出工作臺(tái),，以 70 % ethanol 擦拭無(wú)菌操作抬面,。
無(wú)菌操作工作區(qū)域應(yīng)保持清潔及寬敞,，必要物品，例如支架,、吸管等公用物品可以暫時(shí)放置,，其它個(gè)人實(shí)驗(yàn)用品用完應(yīng)立即拿出。實(shí)驗(yàn)用品以 70% 乙醇擦拭后才帶入無(wú)菌操作臺(tái)內(nèi),。實(shí)驗(yàn)操作應(yīng)在中央無(wú)菌區(qū)域,，一般勿在邊緣區(qū)域操作。
小心取用無(wú)菌之實(shí)驗(yàn)物品,，避免造成污染,。勿碰觸吸管尖頭部或是容器瓶口，亦不要在打開(kāi)之容器正上方操作實(shí)驗(yàn),。容器打開(kāi)后,，以手夾住瓶蓋并握住瓶身，傾斜約 45° 角取用,，盡量勿將瓶蓋蓋口朝上放置桌面,。
選擇正確的培養(yǎng)基
不同的細(xì)胞可能培養(yǎng)基不同，甚至不同的文獻(xiàn)可能對(duì)相同的細(xì)胞培養(yǎng)基成分也是可能不同的,。當(dāng)時(shí)培養(yǎng)神經(jīng)干細(xì)胞,，有文獻(xiàn)就選用 neurobase 培養(yǎng)基，實(shí)驗(yàn)?zāi)康闹饕亲隹寡趸脱趸矫娴?，而這種培養(yǎng)基中含有抗氧化劑成分,，此時(shí),，不得不選擇另外一種不含抗氧化劑的培養(yǎng)基。
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