培養(yǎng)前的工作準備充分
包括耗材的處理、試劑的配置,，無菌檢驗等等,。
玻璃器皿的清洗。對于玻璃器皿(細胞瓶,、裝營養(yǎng)液的瓶子,、小青霉素瓶等)要先用洗衣粉刷干凈(注意死角)，然后沖干凈,。用酸液浸泡 24 h 以上,，之后用清水沖洗 10 遍,，除去殘留酸液。瓶子之類,，沖洗過程要使勁搖晃,。然后在雙蒸水浸泡 24 h。晾干后包扎,，使用鼓風干燥箱160℃ 干烤 2 h 待用,。
試劑配置。細胞培養(yǎng)用的液體一般使用雙蒸以上的水即可,。并注意 pH 值的調節(jié),。
無菌檢驗。主要采用過濾除菌：如胰酶,、抗生素,、G-418 溶液、各類培養(yǎng)基,、丙酮酸鈉,、谷氨酰胺等。有些可以采用高壓滅菌：如 PBS,、D-Hank's等,。
試劑分裝保存
包括營養(yǎng)液、胰酶,、血清等,。
血清特別重要。血清必須貯存于 –20℃低溫培養(yǎng)箱,，如果一次無法用完一瓶,，可將 40～50ml 分裝于無菌酸處理瓶中，甚至置青霉素瓶保存,。一般廠商提供的血清為無菌,，不需再無菌過濾。若發(fā)現(xiàn)血清有許多懸浮物,，則可將血清加入培養(yǎng)基內一起過濾,，勿直接過濾血清。(一般情況下不影響細胞培養(yǎng))
瓶裝血清一定要逐步解凍: 4℃ 冰箱全溶后再分裝,，在溶解過程中須規(guī)則搖晃均勻(小心勿造成氣泡),，使溫度與成分均一，減少沉淀的發(fā)生,。勿直接由 –20℃ 直接至 37℃ 解凍,，因溫度改變太大，容易造成蛋白質凝結而發(fā)生沉淀,。
熱滅活是指 56℃,，30 分鐘加熱已*解凍之血清,。水浴鍋升到 56℃后，將血清放入,，待溫度升高到 56℃ 后計時,，一般 5 分鐘左右規(guī)則搖晃均勻一次。此熱處理之目的是使血清中之補體成份去活化,。除非必須,，一般不要作此熱處理，因為會造成沉淀物之顯著增多,，且會影響血清之品質,。注意更換新血清(包括不同批次)對細胞的影響。
無菌意識要強
實驗進行前,，超凈臺以紫外燈照射 30 分鐘滅菌,，以 70 % ethanol 擦拭無菌操作抬面，并開啟超凈工作臺風扇運轉數(shù)分鐘后,，才開始實驗操作,。
每次操作只處理一株細胞株，以避免失誤混淆或細胞間污染,。實驗完畢后,，將實驗物品帶出工作臺，以 70 % ethanol 擦拭無菌操作抬面,。
無菌操作工作區(qū)域應保持清潔及寬敞,，必要物品，例如支架,、吸管等公用物品可以暫時放置,，其它個人實驗用品用完應立即拿出。實驗用品以 70% 乙醇擦拭后才帶入無菌操作臺內,。實驗操作應在中央無菌區(qū)域,，一般勿在邊緣區(qū)域操作。
小心取用無菌之實驗物品,，避免造成污染,。勿碰觸吸管尖頭部或是容器瓶口，亦不要在打開之容器正上方操作實驗,。容器打開后,，以手夾住瓶蓋并握住瓶身，傾斜約 45° 角取用,，盡量勿將瓶蓋蓋口朝上放置桌面。
選擇正確的培養(yǎng)基
不同的細胞可能培養(yǎng)基不同,，甚至不同的文獻可能對相同的細胞培養(yǎng)基成分也是可能不同的,。當時培養(yǎng)神經干細胞,，有文獻就選用 neurobase 培養(yǎng)基，實驗目的主要是做抗氧化和氧化方面的,，而這種培養(yǎng)基中含有抗氧化劑成分,，此時，不得不選擇另外一種不含抗氧化劑的培養(yǎng)基,。
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