神經(jīng)元培養(yǎng)的portocol，是較難培養(yǎng)的一種細(xì)胞,。關(guān)鍵就是大鼠年齡的選擇,，是胎鼠，新生鼠還是成年大鼠,，理想的是胎鼠,。今天喆圖小編就從這個(gè)說起，用恒溫培養(yǎng)箱培養(yǎng)大鼠海馬神經(jīng)元原代細(xì)胞的幾種培養(yǎng)的方法,。
1.海馬分離：剖宮產(chǎn)取出胚胎,，放在保存液中移至顯微鏡下操作取出胎腦，去掉小腦,，從中線切開左右大腦半球,。剝?nèi)ボ浤X膜以及脈絡(luò)叢血管。然后鈍性分離海馬,，顯微鏡下用剪刀剪下海馬即可
2. 組織消化和計(jì)數(shù)：每個(gè)取出的海馬組織都放置在含有4℃培養(yǎng)液的試管中,。快速分離數(shù)個(gè)胎鼠海馬后就可以做消化和細(xì)胞計(jì)數(shù)了,。消化液用經(jīng)典的胰蛋白酶于恒溫培養(yǎng)箱中 37℃恒溫 30分鐘即可,。然后吹打(1000ul tip 10-20次，2ml 灼燒拉伸的玻璃管,，口徑與200ul tip相當(dāng),，吹打10-20次)到看不到組織為止。很多protocol建議此刻離心,。消化后去上清,，留1-2ml直接吹打，然后就可以直接細(xì)胞計(jì)數(shù),。
3. 分盤培養(yǎng)：神經(jīng)元會(huì)長(zhǎng)的很大,，所以密度要低，50000/ml就可以了,，100mm的plate, 5-7ml,。培養(yǎng)液用無血清無抗生素加B27和N2的DMEM效果就很好。培養(yǎng)皿要用PDL和含血清以及抗生素的培養(yǎng)液預(yù)處理72小時(shí),。這樣可以避免感染也讓神經(jīng)元容易附著和分化,。每一周加1-2ml的新鮮培養(yǎng)液，于恒溫培養(yǎng)箱中37℃恒溫,，2-3周即可成熟,。
4.染色檢測(cè)：后就是標(biāo)記蛋白檢測(cè)，一般可用MAP2標(biāo)記神經(jīng)纖維,，一些神經(jīng)遞質(zhì)受體標(biāo)記突觸,，NeuN標(biāo)記神經(jīng)元細(xì)胞核,。
以上恒溫培養(yǎng)箱實(shí)驗(yàn)內(nèi)容僅供參考，詳情請(qǐng)聯(lián)系喆圖客服,！
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