一,、 目的
使用恒溫培養(yǎng)箱、恒溫水浴鍋,、了解細(xì)胞分裂素對(duì)離體子葉的保綠作用及基本原理和方法,。
二、原理 細(xì)胞分裂素可阻礙核酸水解酶和蛋白水解酶的產(chǎn)生,，因此能延緩器官衰老,，使離體葉片保綠，保綠作用的強(qiáng)弱可通過測(cè)定葉綠素含量的變化來衡量,，也可由葉色變黃枯死的時(shí)間來衡量,。
三、材料,、儀器設(shè)備及試劑
1. 材料：黃瓜子葉,；蘿卜子葉。
2. 儀器設(shè)備：電子分析天平,；分光光度計(jì),；恒溫培養(yǎng)箱；恒溫水浴鍋,；25ml容量瓶,；25ml刻度試管,；試管架；移液管,；黃瓜子葉的培養(yǎng)皿（直徑5cm）,；瓷盤；刀片,；尖頭鑷子,；濾紙；吸耳球等,。
3. 試劑及配制：100μg·ml－16－BA溶液,；95﹪乙醇 ；CaCO3粉末,。 100μg·ml－16－BA母液配制：準(zhǔn)確稱取6－BA 10mg, 加幾滴1mol·L－1HC1溶解（可稍加熱溶解）,，然后慢慢加入蒸餾水稀釋后定容至100ml。
四,、實(shí)驗(yàn)步驟
1. 黃瓜幼苗的培養(yǎng) 精選黃瓜種子,，播入墊有濾紙的瓷盤中，加蒸餾水使之濕潤(rùn)（注意種子不能漬水）,，待種子萌發(fā)后,，在光下培養(yǎng)2～3d左右，直至子葉綠化,。備用,。
2. 系列濃度6－BA溶液配制：吸取100μg·ml－16－BA母液，稀釋成10,、5,、0.5 μg·ml－1的系列濃度溶液。
3. 離體黃瓜子葉的培養(yǎng)
（1）取4套培養(yǎng)皿,，編號(hào),，每套培養(yǎng)皿各墊一張濾紙，分別作0.5,、5,、10μg·ml－1的6－BA溶液和蒸餾水(CK)4個(gè)處理，即為組,。
（2）選取子葉大小,、生長(zhǎng)一致的黃瓜幼苗20株，每處理5 株（10片子葉）,，用刀片切下不附帶葉柄的子葉,，分別稱取鮮重，將數(shù)據(jù)記入下表中。然后將子葉放入組相應(yīng)編號(hào)的培養(yǎng)皿中,，分別加入不同濃度的6－BA溶液3ml, 對(duì)照（CK）加蒸餾水3ml,。蓋上培養(yǎng)皿蓋，置于暗處,，溫度25－28℃培養(yǎng)3 d ,。 另取與組相同的黃瓜幼苗20株，用刀片切下不附帶葉柄的子葉作第二組,，直接用來測(cè)定葉綠素含量,。
4. 第二組黃瓜子葉葉綠素含量的測(cè)定
（1）葉綠素的提取 取3支25ml刻度試管，編號(hào),。稱取第二組的黃瓜子葉三份（3個(gè)重復(fù)）,，每份10片子葉，然后放入相應(yīng)編號(hào)的刻度試管中,，各加入少量CaCO3粉及95﹪乙醇3－4ml,，用玻棒小心將子葉搗碎后,，將試管放入45℃恒溫水浴提取葉綠素30min左右,，直到子葉碎片無色為止，用濾紙過濾于25ml容量瓶中（如殘?jiān)詭ЬG色,，可再加幾ml乙醇繼續(xù)提取,，直至殘?jiān)鼰o綠色）。濾紙上的色素用乙醇慢慢點(diǎn)滴清洗入容量瓶中,，后定容至刻度,，搖勻，待測(cè),。
（2）葉綠素含量的測(cè)定 在652nm波長(zhǎng)處,，以95﹪乙 醇為空白對(duì)照，測(cè)定葉綠素提取液的吸光度（A值）,。并按公式計(jì)算出葉綠素含量,。即為培養(yǎng)前子葉的原始葉綠素含量。
5. 組黃瓜子葉葉綠素殘留量的測(cè)定 組黃瓜子葉在暗處培養(yǎng)3d后,，按上述第（4）步驟方法分別測(cè)定各處理子葉葉綠素含量,，并按公式計(jì)算出各處理葉綠素含量，即為暗培養(yǎng)后子葉葉綠素含量,。
五,、結(jié)果計(jì)算 葉綠素含量計(jì)算公式：
D652 × 提取液總量（ml） 葉綠素含量（mg·g－1Fw）= —————————————— 34.5 × 樣品鮮重（g） 公式中：D652 — 在652nm波長(zhǎng)下測(cè)定的吸光度值 34.5— 葉綠素a、b在652nm波長(zhǎng)處的比吸收系數(shù) 培養(yǎng)后葉綠素含量 暗培養(yǎng)后葉綠素含量占培養(yǎng)前葉綠素含量（﹪）= —————————×100 培養(yǎng)前葉綠素含量
六,、恒溫培養(yǎng)箱,、恒溫水浴鍋、詳情可咨詢喆圖小編。
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