下面喆圖小編為大家介紹使用恒溫培養(yǎng)箱做大腸桿菌轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn),。
大腸桿菌轉(zhuǎn)化：（1）將重組DNA分子導(dǎo)入大腸桿菌受體細(xì)胞進(jìn)行復(fù)制，增殖和表達(dá),，以獲得目的基因,；（2）驗(yàn)證大腸桿菌感受態(tài)細(xì)胞效果；（3）用于分子生物學(xué)其他研究,。 熱擊法： 實(shí)驗(yàn)方法原理：質(zhì)粒DNA或重組DNA粘附在細(xì)菌細(xì)胞表面,，經(jīng)過42°C短時(shí)間的熱擊處理，促進(jìn)吸收DNA.然后在非選擇培養(yǎng)基中培養(yǎng)一代,，待質(zhì)粒上所帶的抗菌素基因表達(dá),，就可以在含抗菌素的培養(yǎng)基中生長(zhǎng)。
實(shí)驗(yàn)步驟：
一,、實(shí)驗(yàn)材料準(zhǔn)備
1. 器材 旋渦混合器,，微量移液取樣器，移液器吸頭,，1.5 ml 微量離心管,，雙面微量離心管架，恒溫水浴鍋,，制冰機(jī),，恒溫?fù)u床，培養(yǎng)皿（已鋪好固體LB-Amp）,，超凈工作臺(tái),，酒精燈，玻璃涂棒,，恒溫培養(yǎng)箱,。
2. 試劑 培養(yǎng)基（不加抗菌素），LB培養(yǎng)基（加抗菌素）,，無菌ddH2O,，IPTG，X-gal,。 3. 材料處理 無菌ddH2O,，1.5 ml 離心管裝入鋁制飯盒（滅菌）,、移液器吸頭裝入相應(yīng)的吸頭盒（滅菌），20%IPTG（M/V）,，2% X-gal（M/V,，用N,N-二甲基甲酰胺配）。
二,、操作步驟
1. 事先將恒溫水浴的溫度調(diào)到42℃,。
2. 從-70℃ 超低溫冰柜中取出一管（100 μl）感受態(tài)菌，立即用手指加溫融化后插入冰上,，冰浴5~10 min,。
3. 加入5 μl 連接好的質(zhì)粒混合液（DNA含量不超過100 ng）,，輕輕震蕩后放置冰上20 min,。
4. 輕輕搖勻后插入42℃水浴中1~2 min進(jìn)行熱休克，然后迅速放回冰中,，靜置3~5 min,。
5. 在超凈工作臺(tái)中向上述各管中分別加入500 μl LB培養(yǎng)基（不含抗菌素）輕輕混勻，然后固定到搖床的彈簧架上37℃震蕩1 h,。
6. 在超凈工作臺(tái)中取上述轉(zhuǎn)化混合液100-300 μl,，分別滴到含合適抗菌素的固體LB平板培養(yǎng)皿中，用酒精燈燒過的玻璃涂布棒涂布均勻,。
7. 如果載體和宿主菌適合藍(lán)白斑篩選的話,，滴完菌液后再在平板上滴加40 μl 2% X-gal，8 μl 20% IPTG,，用酒精燈燒過的玻璃涂布棒涂布均勻。
8. 在涂好的培養(yǎng)皿上做上標(biāo)記,，先放置在37℃恒溫培養(yǎng)箱中30~60 min 直到表面的液體都滲透到培養(yǎng)基里后,，再倒置過來放入37℃恒溫培養(yǎng)箱過夜。
9. 在被細(xì)菌污染的桌面上噴灑70%乙醇,，擦干桌面,，寫實(shí)驗(yàn)報(bào)告。 10. 觀察平板上長(zhǎng)出的菌落克隆,，以菌落之間能互相分開為好,。注意白色菌斑。
注意事項(xiàng)：1. 玻璃涂布棒上的酒精熄滅后稍等片刻,，待其冷卻后再涂,。
詳情可咨詢喆圖客服。（恒溫?fù)u床,、恒溫水浴鍋,、恒溫培養(yǎng)箱）
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