在自然界里,，食用菌都不是單獨存在的,，而是和許多細菌、放射菌,、霉菌等生活在一起的,。所謂菌種分離，就是把這些和食用菌一起生活的雜菌分離出來,，通過培養(yǎng),，獲得純的優(yōu)良菌種。菌種分母種,、原種,、栽培種。
(一）母種的分離培養(yǎng) 食用菌母種的分離,，可分為孢子分離法,、組織分離法以及基內(nèi)菌絲分離等。 1.孢子分離法 孢子分離法,，是用食用菌的有性孢子或無性孢子萌發(fā)成菌絲,，培養(yǎng)成菌種的方法。這種菌種生活力較強，但孢子個體之間有差異,，且自然分化現(xiàn)象較嚴重,，變異大，需經(jīng)出菇試驗才能在生產(chǎn)上應用,。
（l）單孢分離法：是每次或每支試管只取一個擔孢子,， 讓它萌發(fā)成菌絲體來獲得純菌種的方法。蘑菇和草菇用單孢分離得到的菌絲,，有結(jié)實能力,，可采用此法分離生產(chǎn)純菌種。單孢分離生產(chǎn)上較少采用,，而且技術(shù)復雜,，一般采用多孢分離法。
（2）多孢分離法：就是把許多孢子接種在同一培養(yǎng)基上,，讓它們萌發(fā),、自由交配來獲得食用菌純菌種的一種方法。具體操作方法,，有以下幾種： ① 種菇孢子彈射法：選擇個體健壯,、朵形圓正，無病蟲害,、出菇均勻,、高產(chǎn)穩(wěn)產(chǎn)，適應性強的八九分成熟的種菇,，切去大部分,，菌柄用無菌水沖洗數(shù)遍后再用已滅菌的 紗布或脫脂棉、濾紙吸干表面水分,。在接種箱或無菌室內(nèi),，把種菇的菌褶朝下用鐵絲倒掛在玻璃漏斗下面，漏斗倒蓋在培養(yǎng)皿上面,；上端小孔用棉花塞住,。培養(yǎng)皿放 在一個鋪有紗布的搪瓷盤上，靜置12～20小時,，菌褶上的孢子就會散落在培養(yǎng)皿內(nèi),。形成一層粉末狀孢子印（平菇極淡紫色,，蘑菇,、草菇 為褐色，香菇,、金針菇孢子印白色）,。用接種針沾取少量孢子在試管中的瓊脂外面或培養(yǎng)皿上劃線接種,。待孢子萌發(fā)，生成菌落時,，選孢子萌發(fā)早,、長勢好的菌落進行試管培養(yǎng)。 還可用孢子采集器收集孢子,。方法是選好種菇后,，按上述程序，輕輕掀開玻璃鐘罩,，將種菇柄朝下插在孢子采收器的鋼絲架上，放在培養(yǎng)皿正中央,。隨即蓋好玻璃罩,，用紗布將鐘掌周圍塞好。并在紗布上倒少許 HgCl2或無菌水,。移入 20℃左右恒溫培養(yǎng)箱,。 ②褶上涂抹法：按無菌操作分離時；應選擇成熟的種菇,，用接種針直接插入褶片之間,，輕輕抹取褶片表面子實體尚未彈射的孢子，再在培養(yǎng)基上劃線接種,。 ③鉤懸法：取成熟菌蓋的幾片菌褶或一小塊耳片（黑木耳,、毛木耳、白木耳〕,，用無菌不銹鋼絲（或鐵絲,、棉線等其他懸掛材料）懸掛于三角瓶內(nèi)的培養(yǎng)基的上方，勿使接觸到培養(yǎng)基或四周瓶壁,。置適宜溫度下培養(yǎng),、轉(zhuǎn)接即可。 ④貼附法：按無菌操作將成熟的菌褶或耳片取一小塊,， 用溶化的瓊脂培養(yǎng)基或阿拉伯膠,、漿糊等貼附在配管斜面培養(yǎng)基正上方的試管壁上。經(jīng)6～12小時的培養(yǎng),，待孢子落在斜面上,，立即把孢子連同部分瓊脂培養(yǎng)基移植到新的試管中培養(yǎng)即可。 孢子分離得到的母種,、必須進一步提純復壯,，當母種定植一星期左右，菌絲布滿斜面時,，選擇菌絲健壯,、生長旺盛無老化,、無感染雜茵的母種試管，進而轉(zhuǎn)管擴大,，一般到栽培種,，轉(zhuǎn)管不宜超過5次。 孢子分離得到的母種,，必須通過出菇試驗,，鑒定為菌種后，才可供生產(chǎn)使用,。 一般菌類如蘑菇,、平菇、鳳尾菇,、香菇,、冬菇和草菇等，都可用多孢分離法獲得母種,。 現(xiàn)就銀耳孢子分離略述于下： 按 無菌操作獲取種耳后,，懸掛種耳的三角瓶經(jīng)12小時培養(yǎng)后，瓶底培養(yǎng)基表面就有"孢子印",。取出種耳,，置 20℃—25℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)2～3天，培養(yǎng)基表面會出現(xiàn)乳白色透明的糊狀小菌落,，就是銀耳的酵母狀分生孢子形成的少量銀耳菌絲,。此時移接入試管斜面培養(yǎng)基上， 待長滿斜面后,，再移接入營養(yǎng)豐富,，且表面比較干燥的培養(yǎng)基上。經(jīng)30天左右,，菌落長出白色菌絲,。 銀耳的酵母狀分生孢子、菌絲只有與羽毛狀菌絲的子囊菌（香灰菌絲）混合培養(yǎng)時,，由后者幫助分解木材及其他一些纖維物質(zhì),，提供營養(yǎng)，才能利于銀耳孢子萌發(fā),，菌絲的定植和子實體的形成,。
在兩種菌絲交會時，先選出兩種純菌絲,。 羽毛狀菌絲要純化選育,，一般要選取生長迅速，爬壁力強的試管斜面或種瓶,，取先端菌絲,，轉(zhuǎn)管移接,，置25℃—28℃上培養(yǎng)，重復轉(zhuǎn)管幾次即可得到優(yōu)良純種,。 銀耳菌絲的特點,，菌絲生長緩慢，擔孢子也不易萌發(fā),。在進行兩菌混合時,，先取經(jīng)8～IO天培養(yǎng)的銀耳菌絲斜面，按無菌操作方法在該斜面上距銀耳菌絲約0.5厘米處接入一 小塊羽毛狀菌絲,。置25℃下培養(yǎng)1周即得到混合好的銀耳母種,。 2．組織分離培養(yǎng)法 利用子實體內(nèi)部組織，進行無性繁殖而獲得母種的簡便方法,，即組織分離,。該法操作簡便，菌絲生長發(fā)育快,，品種特性易保存下來，特別是雜交育種后,，優(yōu)良菌株用組織分離法能使遺傳特性穩(wěn)定下來,。
常采用以下分離方法。
（l） 子實體分離：種菇要選朵大蓋厚,，柄短,，八九分成熟的優(yōu)良品種。切去菇兩基部,，在無菌箱內(nèi)以0.1％的 HgCl2水浸幾分鐘,，再用無菌水沖洗并揩干或用75％酒精 棉球擦拭菌蓋與菌柄2次，進行表面消毒,。接種時,，只要將種菇撕開，在萌蓋和菌柄交界處或菌褶處,，挑取一小塊組織,；移接 到PDA培養(yǎng)基上。置25℃左右溫度下培養(yǎng)3-5天,，就可以看到組織上產(chǎn)生白色絨毛狀菌絲,，轉(zhuǎn)管擴大即得到菌種。如香菇,、平菇等可以用此方法,。
（2） 菌核分離：茯苓、豬苓,、雷丸等菌的子實體不易采集,。而常見的是它貯藏營養(yǎng)的菌核,。用菌核分離，同樣可以獲得菌種,。方法是將菌核表面洗凈,，用酒精或 HgCl2消毒 后，切開菌核,，取中間組織一小塊,，約黃豆大小，接種在PDA 培養(yǎng)基斜面上,，保溫培養(yǎng),。應注意的是，菌核是貯藏器官,，大部分是多糖類物質(zhì),，只含有少量的菌絲，因此挑取的組織塊要大一些,，如果組織塊過小,，則不易分出菌種。
（3）菌素分離：有一部分子實體不易找到,，也沒有菌核,，可以用菌素進行分離。如蜜環(huán)菌,、假蜜環(huán)菌,。其操作方法是先用酒精或 HgCl2將菌素表面黑 色皮層輕輕擦拭2～3次， 然后去掉黑色外皮層（菌鞘）,，抽出白色菌髓部分,；用無菌剪刀將菌髓剪一小段，接種在培養(yǎng)基上,，保溫培養(yǎng),，即得該菌菌種。 菌素分離要注意：因菌素比較細小,，分離素也比較細小,，分離時極易污染雜菌，所以要嚴格操作,。 3．基內(nèi)菌絲分離培養(yǎng)法 利用食用菌生育的基質(zhì)作為分離材料,，來得到純菌種的一種方法，叫基內(nèi)菌絲分離法,。 此種分離方法是適宜只有在特定的季節(jié)才出現(xiàn),，而且是朝生暮死，不易采得的子實體,?；鶅?nèi)分離法與組織分離法不同之點是,，干燥的菇木或耳木中的菌絲常呈休眠狀 態(tài)。接種后有時并不立刻恢復生長,。因此,，有必要保留較長的時間（約1個月），以斷定菌絲是否能成活,?；鶅?nèi)菌絲分離法又可分為，材中菌絲分離（即菇木或耳木 分離法）及土中菌絲分離法等,。
（1）材中菌絲分離法：就是菇木或耳木分離法,，為了減少雜菌的感染，菇（耳）木在分離之前,，必須進行無菌處理,。可 以把菇（耳）水表面用酒精燈火焰輕輕燒過,，以燒死霉菌的孢子,，或再用0.1％的 HgCl2水浸孢幾分鐘，然后用無菌水沖洗后用無菌濾紙吸干,。接種塊切取時應注意,。接種塊必須在該菌菌絲分布的范圍內(nèi)切取。所以,，菌絲生長緩慢的種類應淺取,；菌種生長快的種類可以深取,。同時。還應根據(jù)菇菌的種類,、木材質(zhì)地,、菇（耳）木粗細、發(fā)育時間的長短來確定菌絲分布的范圍,。然后用一把利刀進行切取,。接種塊應盡量小些，以減少雜菌感染機會,，提離菌種的純度,。接種塊移到培養(yǎng)基上，就 應該放到適合菌絲生長的22℃～26℃ 的溫室或溫箱中培養(yǎng),，使菌絲恢復生長,。
（2）土中菌絲分離：食用菌種類很多，許多土生的食用菌,；孢子不易萌發(fā),。組織分離也不易成功,，用土中菌絲分離獲得純種的方法，叫土中菌絲分離,。 土 中菌絲分離時要注意,，由于土中菌絲體的周圍生活著多種多樣的土壤微生物，因此分離時必須盡可能避開這些微生物的干擾,，盡可能批取清潔菌絲素的,、不帶雜 物的菌絲接種，反復用無菌水沖洗,，在培養(yǎng)基中加入一些抑制細菌 生長的藥物,，如40微克／升的鏈霉素或金霉素。如發(fā)現(xiàn)感染細菌,，可以把菌落邊緣的菌絲挑出來,，接種到木屑培養(yǎng)基中。因細菌沒有分解木質(zhì)素的能力,，因此在木屑培養(yǎng)基中不易擴展,；只局限于接種處。待菌絲長出感染區(qū)后,，就可以再進行擴大提純了,。
（3）子實體基部分離：從瓶栽、袋栽或大床栽培的子實體基部分離出新菌絲的方法,，叫子實體基部分離,，現(xiàn)以袋栽銀耳為例說明：從出耳早、出耳率離,、無病蟲害的栽培室中,；選擇生活力頑強的幼耳5袋，移到氣候溫和,，有散射光的野外場所進行后期培養(yǎng),，以增強菌絲體的生活力。經(jīng)培養(yǎng) 7～10天后,，待子實體直徑達4～5厘米時便可取回,，作為分離的母體。再從中篩選理想的一朵,，用利刀割掉銀耳子實體,，放置于 0℃的冰箱或有C6H6O4S的容器中過夜，以便殺死瓶中的害蟲,。然后用75％酒精或HgCl2擦洗耳基和袋子外邊的雜質(zhì),，連同接種工具、接種培養(yǎng)基等移進無菌室。經(jīng)滅菌后,，用接種刀把袋口上部約15毫米厚的老菌根挖除,，并進行培養(yǎng)。待袋口露出白色菌絲時,，用接種針挑取一塊半粒米大的白色菌結(jié)體,，迅速移入母種試管培養(yǎng)基 的中央，輕輕地脫去接種針,， 塞上棉塞,。 為了能夠獲得較多的母種，一次接種量要有100—200支試管,，以便從中選擇,。分離后應及時移入22℃—24℃恒溫箱或溫室中培養(yǎng)。由于培養(yǎng)基內(nèi)水分較 多,，菌絲恢復要比耳木分離得快,。經(jīng)2-3天后，分離物的邊緣就可看 到白色菌絲,。每天要至少觀察兩次,，以便提純。觀察,、提純方法與耳木分離法擔同,。經(jīng)適溫培養(yǎng)10-15天后，當接種塊扭結(jié)團出現(xiàn)紅,、黃色水珠時,，即可擴大原種。
(二)原種和栽培種的接種培養(yǎng)
母種獲得以后,為了滿足菌種生產(chǎn)的需要,。應選出優(yōu)良,、純度高的母種進一步擴大為原種。 原種培養(yǎng)基一般采用棉籽殼,、木屑、草類等培養(yǎng)基,。
瓶裝或袋裝的原種培養(yǎng)基滅菌后,，可送入滅過菌的接種箱內(nèi)，待瓶中的培養(yǎng)基冷至30℃以下,，可按照無菌操作程序進行接種,。 菌種瓶（袋）放入培養(yǎng)室時，要經(jīng)常進行檢查,，一經(jīng)發(fā)現(xiàn)雜菌污染,，立即取出。培養(yǎng)成的原種，菌絲體必須健壯有力,，緊貼瓶壁而不干縮,，顏色純正，具有一定清香味,，生活力強,，擴制成栽培種時吃料快。 栽培種就是將原種進一步擴大培養(yǎng)成三級種,，它和原種的接種及培養(yǎng)相同,。一般香菇、平菇,、冬菇,、猴頭、木耳,、銀耳的栽培種多用鋸木,、棉皮作培養(yǎng)基。蘑菇多用糞草做培養(yǎng)料,。 栽培種要求料塊不脫水干縮,。菌絲體健壯有力、顏色純正,，有清香味,，無老化現(xiàn)象，無雜菌污染,，有的種許可有少量原基,，接入栽培料后，發(fā)菌快,，長勢好,，生活力強。原種在接栽培種時,，原種瓶口的一層菌絲體應挖去不用,。
（三）液體種的簡單培養(yǎng) 目前，用液體深層發(fā)酵法生產(chǎn)菌種,，具有生產(chǎn)量大,、周期短、菌齡整齊,、成本低廉,、接種方便等特點，是實現(xiàn)食用菌工廠化生產(chǎn)的目標?，F(xiàn)將液體種培育過程簡述于后,，供參考,。 簡言之就是將純正優(yōu)良的菌種，接入液體培養(yǎng)基（固體培養(yǎng)基不加凝固劑）,，使菌絲繁殖形成大量小菌球,，然后將這種培養(yǎng)基拌入木屑或棉籽皮料內(nèi)，制成菌塊,、培養(yǎng)其形成子實體,。還可用于制原種、栽培種,。 培養(yǎng)液體菌種,，可將培養(yǎng)液裝入三角瓶中，約占空瓶的五分之一重量,。用搖瓶機（也稱搖床）來培養(yǎng),。搖瓶機有旋轉(zhuǎn)式和往復式兩種，一般多用往復式,。液體培養(yǎng)基可用馬鈴薯汁（加糖）,，麥芽汁配制，也可用玉米粉,、豆餅粉,、糖、無機鹽等配制,?？梢曰旌吓囵B(yǎng)基，因適用于多種食用菌和藥用菌的培養(yǎng),，均有好效果,。組分：豆餅 粉2％， 玉米粉1％,， 葡萄糖3％,，酵母粉0.5％，磷酸二氫鉀0.1％,，碳酸鈣 0.2％,， pH自然， 12℃滅菌半小時,。然后接種培養(yǎng),。 如果生產(chǎn)量較大，在三角瓶的基礎上,，再逐級擴大種子缸,，發(fā)酵罐中進行液體深層通氣發(fā)酵,，產(chǎn)生大量菌種,。但由于生產(chǎn)中要求設備繁多,，技術(shù)性強，我們還應創(chuàng)造條件,；實現(xiàn)食用菌栽培的現(xiàn)代化,。
（四）菌種質(zhì)量的鑒定 菌種質(zhì)量鑒定較為適合的方法是，做出菇試驗,。但是時間比較長,。在購置菌種時，或在菌種生產(chǎn)中,，如何能知菌絲生長情況,，快速判斷菌種質(zhì)量？我們介紹幾種方法： 1.肉眼觀察：優(yōu)良菌種菌絲濃白,，絨狀,，粗壯密集，生長整齊,，速度快,，香味濃厚。 2.優(yōu)良菌種標準可歸納為："純,、香,、正、壯,、潤"五個字,。檢查時，打開瓶塞,，從菌種瓶中部取出小塊菌絲體,，觀察色澤，聞其氣味,，手捏料塊檢查其含水量,，看是否符合上述要求標準。 3. 顯微鏡檢查：挑取少量菌絲,，置顯微鏡上觀察其形態(tài),，菌絲分枝，分隔情況,，鎖狀聯(lián)合,，細胞膜的厚薄。 培養(yǎng)觀察：從菌種瓶中挑取小塊菌絲體,，接種斜面試管培養(yǎng)基上,，置23℃～25℃恒溫中培養(yǎng)，經(jīng)五周后檢查菌種生活力,。如果菌絲生長快,，旺盛純一,，健壯濃 厚，長且整齊,，則表示菌種的生活力強,。 4.分塊法：在桌上放一張白紙，把菌齡相同的菌種從瓶內(nèi)取出一大塊,，用手分成2塊,，再把2塊分成4塊，4塊 分成8塊,，依次進行,。優(yōu)良菌種整塊多，碎渣少,。劣次菌整塊少,，碎渣多。 5.液體菌種鑒別：當三角瓶或發(fā)酵缸培養(yǎng)3-7天后,，如液面出現(xiàn)氣泡,，產(chǎn)生"油皮"、混濁等現(xiàn)象,，說明菌種本 身帶有雜菌,。如菌塊上浮，或遲遲長出很薄的菌絲層,，則說明菌種生活力弱,。白塊四周的菌絲生長快、濃白,、棉絮狀,，表明菌種生命力強。
（五）菌種生產(chǎn)過程中的雜茵防治 在 生產(chǎn)菌種時,，要時刻注意雜菌污染,，以防為主，一旦發(fā)生,，*很不容易,。所以整個制種過程都必須在無菌條件下進行。接種箱及所有分離,、接種的用具,、器皿，都 要進行嚴格的消毒滅菌,。工作人員的雙手要用消毒劑清洗,，并穿戴消過毒的工作服、帽和口罩,，動作要敏捷,、準確,，盡量不要講話走動，以防空氣中的雜菌感染,。 分離母種時，選擇出菇早,、生活力強,，潮菇是關(guān)鍵，因它生活力強,，接種后迅速占領陣地,，無雜菌侵入的機會。 被污染的菌種,，原因是多方面的,，一般是滅菌不*所致，或因接種時無菌操作不嚴,、瓶蓋不合適造成的,。所以滅菌一定要*，建議在接種萌將培養(yǎng)基置25℃左右恒溫箱中做效果檢查,，經(jīng)2天不長雜菌,，說明*，可以使用,，接種過程中一定要嚴格無菌操作,。 污染雜菌另一個原因可能是分離母種時感染雜菌，因種菇表面帶菌,，消毒不*,，通過組織塊將雜菌帶入培養(yǎng)基。 總之,，污染機會很多,，要注意環(huán)境消毒，按無菌操作規(guī)程*滅菌,，層層把關(guān),，環(huán)環(huán)抓緊，嚴加注意,；提離菌種質(zhì)量,。
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