三維基因組Hi-C技術(shù)解析
Hi-C (High-through chromosome conformation capture) 是以整個(gè)細(xì)胞核為研究對(duì)象,利用高通量測(cè)序技術(shù),,結(jié)合生物信息分析方法,研究全基因組范圍內(nèi)整個(gè)染色質(zhì)DNA在空間位置上的關(guān)系,,獲得高分辨率的染色質(zhì)調(diào)控元件相互作用圖譜,。Hi-C可以與RNA-Seq,、ChIP-Seq等數(shù)據(jù)進(jìn)行聯(lián)合分析,從基因調(diào)控網(wǎng)絡(luò)和表觀遺傳網(wǎng)絡(luò)來(lái)闡述生物體性狀形成的相關(guān)機(jī)制,。
一,、技術(shù)優(yōu)勢(shì)
1、無(wú)需專門構(gòu)建群體,,單個(gè)樣本實(shí)現(xiàn)輔助基因組組裝,;
2、率高,,人類基因組錨定染色體率為98%,,排序和定;
3,、周期短,,性價(jià)比高。
二,、技術(shù)流程
1,、用甲醛對(duì)細(xì)胞進(jìn)行固定,使DNA與蛋白,,蛋白與蛋白之間進(jìn)行交聯(lián),;
2、進(jìn)行酶切(如Hind III等限制性內(nèi)切酶),,使交聯(lián)兩側(cè)產(chǎn)生粘性末端,;
3、末端修復(fù),,引入生物素標(biāo)記,,連接;
4,、解交聯(lián),,使DNA和蛋白、蛋白和蛋白分開,,提取DNA,,打斷,捕獲帶有生物素標(biāo)記片段,,進(jìn)行建庫(kù),; 5、測(cè)序,。
三,、生物信息學(xué)分析流程
四、輔助基因組組裝流程
五,、應(yīng)用領(lǐng)域
1.染色體跨度的單倍型圖譜構(gòu)建 為疾病風(fēng)險(xiǎn)預(yù)測(cè)提供思路 為腫瘤形成機(jī)制提供依據(jù)
為農(nóng)業(yè)動(dòng)植物經(jīng)濟(jì)性狀連鎖標(biāo)記及基因組進(jìn)化奠定基礎(chǔ)
2.探索基因組的3D結(jié)構(gòu)
有助于了解基因組折疊對(duì)基因表達(dá)的影響
有助于了解基因組三維結(jié)構(gòu)對(duì)細(xì)胞發(fā)育,,分化及細(xì)胞命運(yùn)的決定
3.開發(fā)調(diào)控基因的DNA元件
揭示基因組遠(yuǎn)程調(diào)控元件介導(dǎo)的分子網(wǎng)絡(luò)
通過(guò)分析調(diào)控元件空間互作熱點(diǎn),,開發(fā)潛在的藥物作用靶點(diǎn)
4.Hi-C輔助基因組組裝 輔助動(dòng)植物基因組組裝
宏基因組組裝及菌群分類
六、送樣要求
1,、細(xì)胞交聯(lián)
2.5×106細(xì)胞量滿足一個(gè)標(biāo)準(zhǔn)Hi-C文庫(kù),,建議培養(yǎng)5×107至1×108,保證實(shí)驗(yàn)可重復(fù)性
2,、組織DNA
提供組織DNA量為15-20ug
3,、運(yùn)輸方式 足量干冰運(yùn)輸