聯(lián)系電話
廣州菲羅門科學儀器有限公司
初級會員·11年
- 聯(lián)系人：
- 菲羅門
- 電話：
- 020-22826668
- 手機：
- 售后：
- 020-22826668
- 傳真：
- 020-28098130
- 地址：
- 廣州市天河北路179號尚層國際13樓
- 網(wǎng)址：
- www.gzflm.com
掃一掃訪問手機商鋪
液相色譜對于多數(shù)人來說都是很好上手的儀器了，但是就算是用過幾年,、經(jīng)驗豐富的分析員都會習慣于一些錯誤的操作,，經(jīng)常導致一些儀器故障,。
方便快捷的分析過程固然重要，但是為了多做樣品而忽略了一些*的步驟,，往往得不償失,。
哪些操作不能做？哪些懶兒不能偷,？那些小概率的故障師傅沒教怎么辦,？液相使用過程中有哪四大關(guān)鍵因素要注意？
流動相不過濾,。
因為塵?；蚱渌魏坞s質(zhì)微粒都會磨損柱塞、密封環(huán),、缸體和單向閥,，因此應(yīng)預先除去流動相中的任何固體微粒。
流動相在玻璃容器內(nèi)蒸餾,，而常用的方法是濾過,，可采用Millipore濾膜（0.2μm或0.45μm）等濾器。泵的入口都應(yīng)連接砂濾棒（或片）,。
輸液泵的濾器應(yīng)經(jīng)常清洗或更換,。
使用后沒有及時清洗泵
流動相不應(yīng)含有任何腐蝕性物質(zhì)，含有緩沖液的流動相不應(yīng)保留在泵內(nèi),，尤其是在停泵過夜或更長時間的情況下,。
如果將含緩沖液的流動相留在泵內(nèi)，由于蒸發(fā)或泄漏,，甚至只是由于溶液的靜置,，就可能析出鹽的微細晶體，這些晶體將和上述固體微粒一樣損壞密封環(huán)和柱塞等,。
因此,，必須泵入純水將泵充分清洗后，再換成適合于色譜柱保存和有利于泵維護的溶劑（對于反相鍵合硅膠固定相,，可以是甲醇或甲醇-水）,。
流動相走空。
泵工作時要留心防止溶劑瓶內(nèi)的流動相被用完,，否則空泵運轉(zhuǎn)也會磨損柱塞,、缸體或密封環(huán)，終產(chǎn)生漏液,。
沒有流動相流出,，又無壓力指示怎么辦？
可能是泵內(nèi)有大量氣體，這時可打開泄壓閥,，使泵在較大流量（如5ml/min）下運轉(zhuǎn),，將氣泡排盡，也可用一個50ml針筒在泵出口處幫助抽出氣體,。另一個可能原因是密封環(huán)磨損,，需更換。
壓力和流量不穩(wěn)了,？
原因可能是氣泡,，需要排除；或者是單向閥內(nèi)有異物,，可卸下單向閥,，浸入丙酮內(nèi)超聲清洗。
有時可能是砂濾棒內(nèi)有氣泡,，或被鹽的微細晶?；蜃躺奈⑸锊糠侄氯@時,，可卸下砂濾棒浸入流動相內(nèi)超聲除氣泡,，或?qū)⑸盀V棒浸入稀酸（如4mol/L硝酸）內(nèi)迅速除去微生物，或?qū)Ⅺ}溶解,，再立即清洗,。
壓力為啥過高或過低？
可能是是管路被堵塞,，需要清除和清洗,。壓力降低的原因則可能是管路有泄漏。檢查堵塞或泄漏時應(yīng)逐段進行,。
在進行梯度洗脫時,，由于多種溶劑混合，而且組成不斷變化,，因此帶來一些特殊問題,，必須充分重視：
PS：（在液相色譜中對組分復雜的樣品采用梯度洗脫的方法。在同一個分析周期中,，按一定程序不斷改變流動相的濃度配比，稱為梯度洗脫,。
從而可以使一個復雜樣品中的性質(zhì)差異較大的組分能按各自適宜的容量因子k達到良好的分離目的,。
梯度洗脫的優(yōu)點：1.縮短分析周期；2.提高分離能力,；3.峰型得到改善,，很少拖尾；4.增加靈敏度。但有時引起基線漂移,。）
梯度洗脫的流動相選擇不當,。
要注意溶劑的互溶性，不相混溶的溶劑不能用作梯度洗脫的流動相,。有些溶劑在一定比例內(nèi)混溶,，超出范圍后就不互溶,，使用時更要引起注意,。
當有機溶劑和緩沖液混合時，還可能析出鹽的晶體,，尤其使用磷酸鹽時需特別小心,。
忽略的空白梯度洗脫,。
梯度洗脫所用的溶劑純度要求更高，以保證良好的重現(xiàn)性,。進行樣品分析前必須進行空白梯度洗脫,，以辨認溶劑雜質(zhì)峰，因為弱溶劑中的雜質(zhì)富集在色譜柱頭后會被強溶劑洗脫下來,。
用于梯度洗脫的溶劑需*脫氣,，以防止混合時產(chǎn)生氣泡。
忽略了溶劑混合所帶來的粘度變化,。
混合溶劑的粘度常隨組成而變化,，因而在梯度洗脫時常出現(xiàn)壓力的變化。例如甲醇和水粘度都較小,，當二者以相近比例混合時粘度增大很多,，此時的柱壓大約是甲醇或水為流動相時的兩倍。
因此要注意防止梯度洗脫過程中壓力超過輸液泵或色譜柱能承受的zui大壓力,。
關(guān)于六通閥的正確使用和維護：
①樣品溶液進樣前必須用0.45μm濾膜過濾,，以減少微粒對進樣閥的磨損。
②轉(zhuǎn)動閥芯時不能太慢,，更不能停留在中間位置,，否則流動相受阻，使泵內(nèi)壓力劇增,，甚至超過泵的zui大壓力,；再轉(zhuǎn)到進樣位時，過高的壓力將使柱頭損壞,。
③為防止緩沖鹽和樣品殘留在進樣閥中,，每次分析結(jié)束后應(yīng)沖洗進樣閥。通?？捎盟疀_洗,，或先用能溶解樣品的溶劑沖洗,，再用水沖洗。
關(guān)于色譜柱的使用和維護:
菲羅門色譜柱的正確使用和維護十分重要,，稍有不慎就會降低柱效,、縮短使用壽命甚至損壞。
在色譜操作過程中,，需要注意下列問題,，以維護色譜柱。
調(diào)節(jié)流速太快,。
避免壓力和溫度的急劇變化及任何機械震動,。
溫度的突然變化或者使色譜柱從高處掉下都會影響柱內(nèi)的填充狀況；柱壓的突然升高或降低也會沖動柱內(nèi)填料,，因此在調(diào)節(jié)流速時應(yīng)該緩慢進行,，在閥進樣時閥的轉(zhuǎn)動不能過緩（如前所述）。
反沖色譜柱,。
一般說來色譜柱不能反沖,，只有生產(chǎn)者指明該柱可以反沖時，才可以反沖除去留在柱頭的雜質(zhì),。
否則反沖會迅速降低柱效,。
預柱和保護柱
選擇使用適宜的流動相（尤其是pH），以避免固定相被破壞,。有時可以在進樣器前面連接一預柱,，分析柱是鍵合硅膠時，預柱為硅膠,，可使流動相在進入分析柱之前預先被硅膠“飽和”,，避免分析柱中的硅膠基質(zhì)被溶解。
避免將基質(zhì)復雜的樣品尤其是生物樣品直接注入柱內(nèi),，需要對樣品進行預處理或者在進樣器和色譜柱之間連接一保護柱,。保護柱一般是填有相似固定相的短柱。保護柱可以而且應(yīng)該經(jīng)常更換,。
【1】泵壓跳動,，跳動范圍10bar左右。
解決方法：
1,、原先小白頭有點臟,，更換后尚未解決；
2,、將主動閥上的閥芯取出后,，發(fā)現(xiàn)有類似氣泡存在，浸入甲醇-水溶液超聲5min,，以試著去除氣泡，重新將其安裝后再觀察，仍未解決,；
3,、更換新的閥芯，將其安裝后,，不再有跳動,，觀察一段時間后比較平穩(wěn)，成功解決,。
【2】發(fā)生故障：
①plug homing over pressure,。
② 灌注及設(shè)流速時均無壓力也不見液體流出。
③檢測器光閘不能復位④進完大濃度樣品后,，進空白相應(yīng)位置也出峰,。
可能原因：
①在線過濾器堵了。
②泵頭下單向閥堵了,。
③有可能是檢測池臟了,，也有可能是光路有點堵，再不行可能是燈壽命到了,。
④小抹布臟了,，需要換。
解決方法：
①在線過濾器卸下來,，置燒杯,，加純化水煮沸5-10分鐘后甲醇超一下一般就可以了，如果還堵的話就拿稀硝酸泡,，還不行的話就換新的了,，這本身是個消耗品。
②把泵頭下單向閥卸下來,，兩個都有可能堵,，剛卸下來時豎著在耳邊搖一搖是聽不到聲音的。簡單的拿洗耳球把單向閥吹吹就行了（注意方向）,，吹了沒反應(yīng)可以拿溶劑超聲,，但不可水煮，一般超至在耳邊搖能聽見聲音就不影響實驗,。
③先用溶劑把檢測池沖沖,，用啥試具體樣品而定；若沖了還不行,，把檢測池卸下,，看燈能量，若能量還可以（有個幾千）,，可能得清洗光路了,。di一次清洗的話建議還是叫工程師來,，因為待清理的部件在檢測器的zui下方，有一個黑色片片,，中間有一條縫,，而且那一塊的螺絲都是八角的，卸起來很麻煩,。
④把5個樣品盤都拿出來,，可以看見里面有一個黑色突起（看不清用手電筒），平時進樣針就是從那個地方吸樣的,。手伸進去就可以卸下來,，里面有一個小白圈圈（用多了自然就黑了），換一個新的就行了,，買儀器時一般配有10個,。
