樣本采集:根據(jù)實驗需求,,采集適量的人血清,、血漿或細胞培養(yǎng)上清樣本。血清樣本需待血液自然凝固后離心獲??;血漿樣本則需在采血時加入合適抗凝劑后離心分離;細胞培養(yǎng)上清按標準細胞培養(yǎng)流程收集,,并離心去除細胞碎片等雜質(zhì),。采集后的樣本應(yīng)妥善保存,避免反復(fù)凍融影響檢測結(jié)果,。
試劑盒準備:從冰箱取出試劑盒,,在室溫(20℃ - 25℃)平衡 30 分鐘,使試劑盒內(nèi)各試劑溫度均勻,,同時準備好移液器,、吸頭、酶標儀等實驗器材,,并確保其性能正常,。
加樣:將標準品、待測樣本及空白對照按規(guī)定體積準確加入微孔板相應(yīng)孔中,,輕輕振蕩混勻,,使樣本與包被抗體充分接觸,然后在設(shè)定溫度下孵育一定時間,。
洗板:孵育結(jié)束后,,棄去孔內(nèi)液體,用洗滌液充分洗滌微孔板 3 - 5 次,,以徹di清除未結(jié)合的物質(zhì),,減少非特異性信號干擾,。每次洗滌后需將微孔板拍干,防止殘留液體影響后續(xù)反應(yīng),。
加酶標抗體:向各孔加入適量酶標抗體,,振蕩混勻后再次孵育。
顯色與終止:加入底物顯色液,,在避光條件下孵育,,待顏色變化至合適程度時,加入終止液終止反應(yīng),,使反應(yīng)停止在最佳檢測狀態(tài),。
結(jié)果測定:立即使用酶標儀在規(guī)定波長下測定各孔 OD 值,根據(jù)標準曲線計算出樣本中 Oncostatin M 的含量,。
高靈敏度:能夠檢測到極低濃度的 Oncostatin M,,滿足對微量樣本或低表達水平的檢測需求。
特異性強:試劑盒中的抗體對 Oncostatin M 具有高度特異性,,與其他類似物質(zhì)交叉反應(yīng)極小,,保證檢測結(jié)果的準確性。
重復(fù)性好:同一批樣本多次檢測結(jié)果穩(wěn)定,,變異系數(shù)小,,為科研及相關(guān)應(yīng)用提供可靠且可重復(fù)的數(shù)據(jù)支持。